Укажите основные причины ошибок метода пцр

СКИДКА 25%

Быстрая диагностика

Проверь здоровье за один день

Скидка до 25%

Диагностика у уролога

Проверь здоровье за один день
Удобно и Выгодно
Всего один день — живи спокойно год!

Скидка 20%

Знакомство с ЛОР-врачом

Лечение лазером

лор заболеваний

Cкидка 15%

Эффективно!
Безболезненно!

Лечение эректильной
дисфункции

Скидка 20%

Быстрый эффектИзменим качество Вашей жизни!

Диагностика «Женское здоровье»

Скидка 20%

Вся диагностика в один день!Удобно и выгодно!

Лечение недержания мочи

Скидка 20%*

Эффект после первой процедуры! Не меняете свой ритм жизни! Супер выгодно!

Возможны ли ошибки в ПЦР-диагностике? Ложноотрицательные и ложноположительные результаты ПЦР

На получение ложных результатов в ПЦР-диагностике — как ложноположительных, так и ложноотрицательных — могут повлиять различные обстоятельства.

Применение метода полимеразной цепной реакции — ПЦР — требует строжайшего соблюдения всех этапов анализа, начиная от забора анализа врачом до интерпретации полученных результатов анализа. Насколько информативен ПЦР-анализ зависит от многих обстоятельств.

Ложноположительный результат анализа может получиться в результате попадания в материал (мазок или соскоб уретры) крови.
Подобные же ложноположительные результаты ПЦР-анализа получаются вследствие не попадания в материал эпителиальных клеток, а содержания большого количества совершенно неинформативной слизи.
На получение ложных результатов ДНК-анализа оказывает влияние неправильная транспортировка и хранение полученных проб. ДНК инфекции в этом случае может разрушаться и как следствие — ложноотрицательный результат.
Нарушение стерильности при проведении ПЦР-диагностики — еще одна причина ложноположительной ПЦР. В забранный материал пациента могут попасть чужеродные бактерии с рук врача, с одежды, со стекла или загрязненных инструментов, многоразовой посуды. В результате обнаружится «несуществующая» инфекция.
Непригодность реагентов. Неоснащенная и несовременная лаборатория, где на непригодность реагентов врачи «закрывают глаза» — это еще одна и серьезных причин недостоверной диагностики. Конечно, это сильно удешевляет лабораторную диагностику, но не может не сказаться на ее результатах.

Стремясь избежать подобных ошибок, врачи медицинского центра «Евромедпрестиж» очень серьезно подходят к проведению лабораторной диагностики: используют только одноразовые материалы на всех этапах анализа, соблюдают необходимые меры по поддержанию полной стерильности лаборатории и врачебного кабинета. У нас работают только врачи высшей категории и опытные лаборанты, которые регулярно повышают свою квалификацию, чтобы не лечить несуществующие болезни, а получать достоверные результаты.

читать далее
свернуть

АНАЛИЗЫ, КОТОРЫЕ МОЖНО СДАТЬ У НАС:

Covid-19. Анализы на антитела к коронавирусу
Анализы на инфекции
Анализы Подготовка и расшифровка
- Анализ кала
- Анализ крови на RW
- Анализ крови на сахар
- Анализ крови на хламидиоз
- Анализ мочи
- Анализ мочи по Нечипоренко
- Анализ мочи при беременности
- Анализ на АФП
- Анализ на ВИЧ
- Анализ на гемоглобин
- Анализ на гормон ЛГ
- Анализ на гормоны
- Анализ на дисбактериоз
- Анализ на кортизол
- Анализ на краснуху
- Анализ на онкомаркеры
- Анализ на остеопороз
- Анализ на паразитов
- Анализ на паракоклюш
- Анализ на прогестерон
- Анализ на пролактин
- Анализ на РАРР-А
- Анализ на РЭА
- Анализ на Са-125
- Анализ на Са-19-9
- Анализ на совместимость
- Анализ на тестостерон
- Анализ на ТТГ
- Анализ на ФСГ
- Анализ на эстриол
- Анализ соскоба на наличие яиц остриц
- Анализ спермы (Спермограмма)
- Анализы на грибок
- Биохимический анализ крови
- Гемостазиограмма, Коагулограмма
- ДНК-диагностика
  - Достоинства и недостатки ПЦР-диагностики
  - Метод ПЦР в гинекологии
  - Ошибки в ПЦР-диагностике
  - ПЦР и ИФА-диагностика
  - Современная ДНК-диагностика
  - Строение ДНК
  - Этапы полимеразной цепной реакции (ПЦР)
- Общий анализ крови (Клинический анализ крови)
- Общий мазок
- Определение беременности. Анализ крови на беременность
Анализы при бесплодии
Анализы при дисфункции яичников
Анализы при кистах и опухолях яичников
Анализы при нарушениях веса
Анализы при подборе гормональной контрацепции
Анализы при подготовке к беременности
Молекулярно-генетические исследования
Обследование молочных желез
Обследование при гирсутизме и проблемах с волосами
Обследование при задержке менструации
Обследование при зуде гениталий
Обследование при менопаузе
Обследование при невынашивании беременности
Обследование при эндометриозе
Обследование щитовидной железы
Обследования при определении овуляции
Полное обследование организма
Эрозия шейки матки

Остались вопросы? Мы перезвоним Вам в течении 10 минут

Наши цены

Аллергологические исследования (панели аллергенов)

Наименование услуги	Стоимость
Панель №22 Горбуша, кита, лещ, лосось, речной окунь, сом, скумбрия, навага	1 100 ₽
Панель №23 Дорадо, икра красная, лангуст, осьминог, раки, речная форель, рыба сиг, устрицы	1 100 ₽
Панель аллергенов респираторная №2 (RIDA-screen) , IgE (до 5р.д.)	5 090 ₽
Респираторная скрининговая панель из смесей аллергенов	7 650 ₽
Респираторная панель	8 400 ₽
Кошка (эпителии)	720 ₽
Собака- перхоть	720 ₽
Собака- шерсть	720 ₽

Бактериологические исследования

Наименование услуги	Стоимость
Посев на флору с определением чувствительности к антибиотику	1 520₽
Посев на микрофлору из ЛОР органов с определением чувствительности к антибиотикам, бактериофагам и антимикотикам	1 490 ₽
Посев мокроты на микрофлору с определением чувствительности к антибиотикам	2 200 ₽
Посев мочи с определением чувствительности к антибиотику	1 380 ₽
Посев секрета простаты с определением чувствительности к антибиотику	1 380 ₽
Посев спермы с определением чувствительности к антибиотику	1 380 ₽
Посев на Mycoplasma hominis с чувствительностью к антибиотику	1 110 ₽
Посев на Ureaplasma urealyticum с чувствительностью к антибиотику	1 110 ₽
Посев на дифтерию	860 ₽
Посев на дрожжеподобные грибы (Candida) с определением чувствительности к антибиотику	850 ₽
Посев на листерии с определением чувствительности к антибиотикам	1 210 ₽
Посев на трихомонаду с чувствительностью к антибиотику	1 500 ₽
Посев на гонорею с чувствительностью к антибиотику	1 500 ₽

Биохимические исследования крови

Наименование услуги	Цена,₽
Аланиновая трансаминаза (АЛТ)	290
Аспарагиновая трансаминаза (АСТ)	290
Альфа амилаза	290
Амилаза панкреатическая	410
Альбумин	350
Аполипопротеин А1	630
Аполипопротеин В	630
Антистрептолизин –О (АСЛ-О)	550
Ангеотензинпревращающий фермент (АПФ)	2 590
Антитела к инсулину	975
Антитела к бета- клеткам поджелудочной железы	1 330
Антитела к глутаматдекарбоксилазе (АТ к GAD)	1 330
Гамма-ГТ (ГГТ)	290
Глюкозотолерантный тест	1 130
Билирубин общий	290
Билирубин прямой	290
Билирубин непрямой	410
Белковые фракции	690
Витамин В-12	925
Витамин В-12 активный (холотранскобаламин)	2 050
Глюкоза	290
Гликированный гемоглобин	750
Гомоцистеин	1 800
Д (ИФА)	1 590
Индекс атерогенности	350
Железо	300
КФК (креатинфосфокиназа)	410
Кислая фосфатаза	290
ЛДГ (лактатдегидрогеназа)	290
Латентная железосвязывающая способность сыворотки	330
Лактат	730
Липаза	455
Липопротеин (а)	970
ЛПВП	290
ЛПНП	290
ЛПОНП	330
Миоглобин	1 090
Креатинин	290
Креатининкиназа МВ (КФК- МВ)	520
Кальций общий	285
Кальций ионизированный	480
Калий/Натрий/Хлор	420
Калий	290
Магний	340
Мочевина	290
Мочевая кислота	290
Медь	410
Натрий	290
Общий белок	290
ОЖСС	300
Риск атеросклероза (скрининг)- триглицериды, холестирин общий, ЛПВП, ЛПНП, коэффициент атерогенности	880
Ревматоидный фактор	550
Трансферрин	650
Тропонин I	1 190
Триглицериды	290
Ферритин	685
Фруктозамин	800
Фосфор	300
Фолиевая кислота	999
Хлор	290
Холестерин общий	290
Холинэстераза	350
Цинк	300
Церулоплазмин	640
Щелочная фосфатаза	290
С- реактивный белок	550
С- реактивный белок ультрачувствительный	610
Эозинофильный катионный белок (ЕСП)	910
Эритропоэтин	1 350
в- Cross laps	1235

Биохимический анализ мочи

Наименование услуги	Цена, ₽
Альбумин (микроальбуминурия)	450
Альфа амилаза	330
Аминокислоты (32) в моче	6 590
Глюкоза (суточная моча)	330
Дезоксипиридинолин (ДПИД)	1 570
Кальций	230
Калий/Натрий/Хлор	350
Креатинин	270
Катехоламины: адреналин, норадреналин, дофамин (суточная моча)	1 850
Магний	330
Микроальбумин (разовая моча)	500
Микроальбумин	760
Мочевая кислота	330
Мочевина	330
Метанефрины (суточная моча)	3 350
Метаболиты катехоламинов и серотонина (ГВК, ВМК, 5-ОИУК )	1 800
17-КС	1 800
Кортизол (суточная моча)	1 120
Норметанефрины (суточная моча)	1 700
Общий белок	320
Органические кислоты в моче	5 700
Промежуточные метаболиты катехоламинов (метанефрин и норметанефрин )	2 100
Свободный кортизол	850
Фосфор	330

Генетика

Наименование услуги	Стоимость
Генетический риск атеросклероза и ИБС, предрасположенность к дислипидемии	7 500 ₽
Развернутое генетическое обследование для женщин	12 900 ₽
Фармакогенетика Варфарин	3 200 ₽
Синдром Жильбера	3 300 ₽
Синдром Жильбера расширенный	3 700 ₽
Генетика метаболизма Лактозы	1 550 ₽
Prenetix- не инвазивная пренатальная диагностика	28 000 ₽
Риск развития сахарного диабета 1 типа	12 700 ₽
Риск развития сахарного диабета 2 типа (определение вариантов в генах TCF7L2,PPARG, ADIPOQ.)	7 900 ₽
Кардиогенетика Гипертония	4 850 ₽
Кардиогенетика Тромбофилия	3 630 ₽
Генетика метаболизма Фолатов	3 200 ₽
Рак молочной железы	4 300 ₽
Рак молочной железы и яичников-расширенный комплекс	22 000 ₽
Исследование полеморфизов в гене ТР53 (рак молочн железы)	4 500 ₽
Мужское бесплодие: Определение генетических причин азооспермии	2 500 ₽
Женское бесплодие	20 700 ₽
Беременность(комплекс)- риск невынашивания	3 700 ₽
Риск преэклампсии	5 800 ₽
HLA генотипирование 2 класса для пары ( цена за 1 человека)	4 700 ₽
Аналитическое заключение врача- генетика по одному профилю	2 500 ₽
Компленк «Акне»	28 050 ₽
Анализ кариотипа (1 пациент)	5 000 ₽
Кариотипирование с выявлением аберраций	5 400 ₽
Анализ кариотипа супружеской пары	7 000 ₽
Кариотипирование с выявлением аберраций с фото хромосом	6 500 ₽
Анализ кариотипа с фото хромосом (1 пациент)	6 500 ₽
Анализ кариотипа супружеской пары с фото хромосом	9 000 ₽
Анализ кариотипа с выявлением аббераций хромосом (супружеской пары)- с фотографией	11 000 ₽

Гормональные исследования

Наименование услуги	Цена, ₽
Анренокортикотропный гормон (АКТГ)	930
Альфафетопротеин (АФП)	960
Альдостерон	1 050
Андростендион	1 420
Антимюллеров гормон	1 580
Антитела антиовариальные	1 520
Антитела к циклическому цитруллиновому (CCР)	1 430
Антимитохондриальные антитела (АМА)	1 430
Гастрин-17	1 870
Глобулин, связывающий половые гормоны ГСПГ	980
Дегидроэпиандростендион-сульфат (ДГЭА-S)	590
Дигидротестостерон	1 390
Инсулин	650
Ингибин- В	2 370
Индекс ROMA (риск возникновения эпиталиальной карциномы яичников)	2 560
Кортизол	595
Кальцитонин	990
Лютеинизирующий гормон (ЛГ)	595
Лептин	1 150
Макропролактин (вкл. определение пролактина)	1 230
Маркер формирования костного матрикса (Р1NP )	1 380
Остеокальцин	1 210
Тестостерон	595
Т4 общий	595
Т4 свободный	595
Т3 общий	595
Т3 свободный	595
Тиреотропный гормон (ТТГ)	595
ТГ (тиреоглобулин)	870
Тиреоглобулин (ТГ)	950
17- ОН прогестерон	760
Паратгормон	930
Пролактин	595
Прогестерон	595
Проинсулин	1 280
Простатический специфический антиген (ПСА) общий	690
ПСА общий/ПСА свободный	1 390
Ренин + ангиотензин I	1 090
Ренин	1 390
СА 15-3	930
СА 19-9	930
СА 242	2 100
Cyfra-21-1	1 890
С- пептид	650
Соматотропный гормон (СТГ)	1 590
Свободный тестостерон	1 290
Соматомедин С	1 350
Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ)	595
Эстриол свободный	980
Эстрадиол	595

Диагностика аутоимунных заболеваний

Наименование услуги	Цена ,₽
Антитела к кардиолипину (IgG, IgM, IgA) (сумм.) кол.	1 450
Антитела к тиреопероксидазе (АТ- ТПО)	610
Антитела к рецепторам (АТ- ТТГ)	1 790
Антитела к антигенам миокарда	2 790
Антинуклеарные антитела/ ANA-скрининг (антигены ds-DNA, гистоны, рибосомальный Р-протеин nRNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, Jo-1, центромеры	1 110
Антитела к односпиральной (денатурированной) ДНК (a-ssDNA)	990
Антитела к двухспиральной (нативной) ДНК (a-dsDNA)	990
Антитела к циклическому цитруллиновому пептиду (ССР)	1 590
Антитела к В- 2 гликопротеину IgA/М/G (сумм.) кол.	1 100
Антитела к цитоплазме нейтрофилов, NSCA класса IgG	960
Антитела к цитоплазме нейтрофилов, NSCA класса IgА	1 050
ANCA- профиль (протеиназа 3, МПО, эластаза, катепсин G, BP, лактоферин) IgG полуколич.	2 790
Антитела к ХГЧ IgM	2 200
Антитела к ХГЧ IgG	2 200
Антитела к фосфатидилсерину IgG кол.	1 250
Антитела к фосфатидилсерину IgМ кол.	1 250
Антитела к фосфолипидам IgG кол.	1 250
Антитела к фосфолипидам IgМ кол.	1 250
Антиспермальные антитела	1 320
Антиовариальные антитела	1 290
Антитела IgA к тканевой трансглутаминазе	650
Антитела IgG к тканевой трансглутаминазе	650
Антитела IgA к глиадину	965
Антитела IgG к глиадину	965
Антитела к Saccharomyces cerevisiae (ASCA), IgA	1 630

Диагностика бактериальных инфекций (сыворотка)

Наименование услуги	Стоимость
Антитела класса IgA к хламидии трахоматис	755 ₽
Антитела класса IgG к хламидии трахоматис	755 ₽
Антитела класса IgM к хламидии трахоматис	755 ₽
Антитела класса IgA к хламидии пневмонии	1 050 ₽
Антитела класса IgG к хламидии пневмонии	1 050 ₽
Антитела класса IgM к хламидии пневмонии	600 ₽
Антитела класса IgG к микоплазме пневмония	600 ₽
Антитела класса IgМ к микоплазме пневмония	600 ₽
Антитела класса IgА к микоплазме пневмония	960 ₽
Антитела класса IgG к микоплазме хоминис	555 ₽
Антитела класса IgА к микоплазме хоминис	555 ₽
Антитела класса IgМ к микоплазме хоминис	960 ₽
Антитела класса IgG к уреаплазме уреалетикум	555 ₽
Антитела класса IgА к уреаплазме уреалетикум	555 ₽
Антитела класса IgG к хеликобактер пилори	910 ₽
Антитела класса IgA к хеликобактер пилори	910 ₽
Иерсиниоз (РПГ ) полуколичественный	520 ₽
Антитела класса IgG к иерсинеозу	830 ₽
Антитела класса IgА к иерсинеозу	830 ₽
Антитела класса IgG к возбудителю бруцеллеза	960 ₽
Антитела класса IgМ к возбудителю бруцеллеза	960 ₽
Антитела класса IgG к возбудителю боррелиоза	960 ₽
Антитела класса IgМ к возбудителю боррелиоза	960 ₽
Антитела класса IgМ к возбудителю коклюша	970 ₽
Антитела класса IgGк возбудителю коклюша	970 ₽
Антитела класса IgM к возбудителю ветряной оспы	880 ₽
Антитела класса IgG к возбудителю ветряной оспы	880 ₽
РПГА с сальмонеллёзным диагностикумом (О-антиген )(anti-Salmonella A,B,C1,C2,D,E )	770 ₽
Антитела суммарные к туберкуллезу	960 ₽

Диагностика вирусных инфекций (сыворотка)

Наименование услуги	Цена, ₽
Антитела к вирусу иммунодефицита человека 1 и 2 типов (ВИЧ)	600
ВИЧ –ДНК (ПЦР), качественное определение	3 630
ВИЧ –определение РНК вируса , количественный	12 150
Гепатит С (Hepatitis C Virus ), кач. определение РНК	755
Антитела к вирусу гепатита Е (Ig G)	845
Антитела к вирусу гепатита Е (Ig М)	845
Вирус простого герпеса 1 и 2 типа (HSV) кач.определение ДНК	465
Антитела класса IgG к вируса простого герпеса 1 и 2 типа (кол.)	790
Антитела класса IgМ к вируса простого герпеса 1и 2 типа	790
Антитела класса IgМ к вируса простого герпеса 1 типа (кол.)	490
Антитела класса IgG к вируса простого герпеса 6 типа	840
Антитела класса IgG к вируса простого герпеса 8 типа	1160
Антитела класса IgG к вируса простого герпеса 1 (кол.)	710
Антитела класса IgG к вирусу простого герпеса 2 (кол.)	620
Авидность АТ IgG к герпесу 1, 2 типа	1 330
Антитела к вирусу герпеса 6 типа IgM	1 170
Антитела класса IgM к цитомегаловирусу	755
Антитела класса IgG к цитомегаловирусу	755
Авидность антител класса IgG к цитомегаловирусу	1 155
ВЭБ IgG (к ядерному антигену)	1 050
ВЭБ количественный, определение ДНК	550
ВЭБ IgG (к капсидному белку)	840
ВЭБ IgМ (к капсидному белку)	840
ВЭБ IgG (к раннему белку)	970
ВПГ 1 и 2 тип (кол) IgG	960
ВПГ 1 и 2 тип (кол) IgM	790
Антитела IgG к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр ( Anti-EBV-EA IgG)	755
Антитела класса IgG к вирусу краснухи	930
Антитела класса IgM к вирусу краснухи	930
Авидность антител к вирусу краснухи	1 050
Антитела класса IgG к вирусу кори	865
Коклюш (IgM)	970
Коклюш (IgA)	970
Коклюш (Anti-B pertussis IgG)	970
Варицелла-Зостер (Anti- VZV IgG)	880
Варицелла-Зостер (Anti- VZV IgM)	880
Вирусный паротит	765
Антитела класса IgG к аденовирусу	1050
Антитела класса IgA к аденовирусу	1 050
Кандидоз (Anti-Candida albicans IgG)	910
Антитела класса IgG к респираторно-синцитиальному вирусу	950
Антитела к лямблиям сумм кач	685
Антитела к лямблиям IgM кач	840
Антитела к хламидиям пневмонии IgA	760
Антитела к хламидиям пневмонии IgM	760
Антитела к хламидиям пневмонии IgG	760
Антитела к микоплазме пневмонии IgG	600
Антитела к микоплазме пневмонии IgA	840
Антитела к микоплазме пневмонии IgM	600
Антитела к микоплазме хоминис IgA	840
Антитела к микоплазме хоминис IgM	840
Антитела к микоплазме хоминис IgG	840
Паракоклюш	520
Сифилис IgG	810
Сифилис IgM	810
Антитела к токсокар IgG кач	560
Авидность к токсоплазме IgG	910
Антитела к токсоплазме IgG	870
Антитела к токсоплазме IgM	870
Антитела к ЦМВ IgM	840
Антитела к ЦМВ IgG	840
Авидность к ЦМВ IgG	1 150
Антитела IgA к тканевой трансглутаминазе	720
Антитела IgG к тканевой трансглутаминазе	720

Забор материала

Наименование услуги	Стоимость
Забор биологического материала	390 ₽
Забор биологического материала: кровь из вены	390 ₽
Забор биологического материала: кровь из пальца	390 ₽
Забор биологического материала: мазок	390 ₽
Забор биологического материала: секрет простаты	390 ₽

Имунный статус

Наименование услуги	Цена, ₽
Исследования основных параметров клеточного иммунитета: подсчет лейкоцитов, лимфоцитов, нетрофилов, CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD56, CD4/CD8, CD19	3 800
Расширенное иммунологическое исследование клеточного иммунитета: подсчет лейкоцитов, лимфоцитов, нейрофилов, CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD38, CD54, CD71, CD95, CD56, CD4/CD8, CD19, CD95	5 900
Иммуноглобулины A, M, G	850
Иммуноглобулины A (IgA)	380
Иммуноглобулины М (IgM)	380
Иммуноглобулины G (IgG)	380
Иммуноглобулины E (IgE)	780
С3 компонент комплемента	870
С4 компонент комплемента	870
Общие циркулирующие имунные комплексы (ЦИК)	1 010
НСТ- тест, латекс- тест (фагоцитоз)	610

Интерфероновый статус

Наименование услуги	Стоимость
Интерфероновый статус без определения чувствительности лейкоцитов к препаратам	3 400 ₽
Роферон	630 ₽
Амиксин	630 ₽
Неовир	630 ₽
Циклоферон	630 ₽
Галавит	630 ₽
Гепон	630 ₽
Иммуномакс	630 ₽
Ликопид	630 ₽
Полиоксидоний	630 ₽
Ридостин	630 ₽
Кагоцел	630 ₽
Имунофан	630 ₽
Арбидол	630 ₽
Глутоксим	630 ₽
Тактивин	630 ₽
Тимоген	630 ₽
Иммунал	630 ₽
Имунорикс	630 ₽

Инфекции, вызываемые простейшими, паразиты и грибы

Наименование услуги	Цена, ₽
Антитела класса IgM к токсоплазме гонди	755
Антитела класса IgG к токсоплазме гонди	755
Авидность антител IgG к токсоплазме гонди	910
Антитела к возбудителю к псевдотуберкуллёза (РПГА)	515
Аскариды IgG	975
Антитела класса IgG к антигенам аскарид	975
Антитела класса IgG к амебам	950
Амебы IgG	755
Антитела класса IgG к возбудителю аспергиллеза	920
Антитела класса IgG к возбудителю кандидоза	725
Кандидоз (Anti-Candida albicans IgG)	910
Лейшманиоз	2 090
Лептоспироз	1 390
Лямблия сумм. кач	685
Лямблия IgМ кач	840
Лямблия (сумм.)	685
Лямблия IgМ	685
Описторхоз IgG кач.	410
Описторхоз IgG	410
Печёночный сосальщик	1 390
Сальмонеллы (антигены О,.Н) полукол	450
Свиной цепень	1 490
Токсокары IgG кач.	410
Токсокара IgG	410
Трихинеллы IgG кач.	410
Трихинелла IgG	410
Эхинококки IgG кач.	410
Эхинококк IgG	410
Исследования микробиома человека тонкой кишки методом ГХ — МС (по Осипову)	4 700

Исследование кала

Наименование услуги	Стоимость
Анализ кала общий (копрограмма)	620 ₽
Анализ кала на определение панкреатической эластазы	2 350 ₽
Анализ кала на дисбактериоз	1 910 ₽
Исследования микробиома человека толстой кишки (просветная кишка) методом ГХ – МС (по Осипову)	4 700 ₽
Анализ кала на простейшие и яйца гельминтов	440 ₽
Анализ кала на простейшие и яйца гельминтов ПАРАСЕП	920 ₽
Кальпротектин в кале	2 900 ₽
Анализ на энтеробиоз	430 ₽
Анализ кала на скрытую кровь	440 ₽
Токсины А и В Clostridium difficile	1100 ₽
Ar Helic.pylori в кале	850₽
Исследования микробиома человека толстой кишки (просветная микробиота) ГХ — МС (по Осипову )	4 700 ₽

Исследования крови

Наименование услуги	Цена, ₽
АЧТВ	300
Антитромбин III	520
Анализ крови на свертываемость	430
Анализ крови на свертываемость+ длит.кровотечения	790
Анализ на определение группы крови (резус фактор)	750
Антитела к резус фактору	1 110
Антигены системы Kell	870
Волчаночный антикоагулянт	1 100
Инсулино- резистентность	1 020
Клинический анализ крови 3 (гемоглобин, лейкоциты, СОЭ)	730
Клинический анализ крови (развёрнутый)	730
Клинический анализ крови (развёрнутый+ тромбоциты)	730
Коагулограмма (гемостазиограмма)	1 350
Определение уровня сахара в крови	280
Определение уровня сахара в крови (с нагрузкой)	1 130
Протромбиновый индекс,протромбин по Квику + МНО	405
Протромбиновое время	405
Протеин S	1 560
Протеин C	2 200
Фибриноген	405
РКФМ	320
D- димер	1 485

Общеклиническое исследование отделяемого

Наименование услуги	Цена, ₽
Тест на беременность по моче	240
Посткоитальный тест	640
Мазок на флору	600
Мазок из носа на эозинофилы	400
Общеклиническое исследование назального секрета (риноцитограмма)	850
Соскоб шейки матки и/или цервикального канала по Лейшману-1препарат	670
Исследование пунктатов молочной железы и кожи	670
Исследование отделяемого молочной железы	670
Исследование пунктатов щитовидной железы	670
Анализ спермограммы с исследованием антиспермальных антител IgA IgG ( MAR — тест)	3 920
Жидкостная цитология	2 200
Определение онкомаркера в жидкостной цитологии	5 100
Биопсия исследование 1 фрагмента (гисталогия)	3 870
Соскоб с кожи на грибы	750
Соскоб с ногтевых пластинок на грибы	750
Соскоб на демодекс	750
Соскоб с кожи на чесоточного клеща	750
Соскоб на трепонему	750
Анализ спермограммы	1 990
Общеклиническое исследование сока предстательной железы	600
Анализ мочи общий	355
Анализ мочи (2-х стаканная проба)	630
Анализ мочи по Нечипоренко	500

ПЦР диагностика (соскоб)

Наименование услуги	Стоимость
ПЦР 10	2 950 ₽
ДНК Listeria monocytogenes (ПЦР)	850 ₽
ДНК Listeria monocytogenes (кровь)	450 ₽
Вирус простого герпеса 6 типа (HHV), количественно ДНК	400 ₽
Epstein-Barr virus (EBV), количественно, ДНК	350 ₽
Cytomegalovirus (CMV), количественно, ДНК	300 ₽
Флороценоз	1 690 ₽
Флороценоз и Микроскопия	1 880 ₽
Флороценоз и NCMT	1 980 ₽
Флороценоз и NCMT и Микроскопия	2 610 ₽

ПЦР и NASBA диагностика (соскоб)

Наименование услуги	Цена, ₽
ПЦР Бакретиальный вагиноз колич.	650
ПЦР Хламидия кач. ДНК	420
ПЦР Хламидия кол.	650
ПЦР Флороценоз микоплазмы	740
ПЦР Микоплазма genitalium- кол. ДНК	650
ПЦР Микоплазма hominis – кол.ДНК	650
ПЦР Микоплазма hominis- кач. ДНК	420
ПЦР Микоплазма genitalium- кач. ДНК	420
ПЦР Вирус Варицелла-Зостер	420
Соскоб с гортани на Mycoplasma / Chlamidia (pneumoniac)	610
ПЦР Уреаплазма кач. ДНК	420
ПЦР Уреаплазма колич.	650
ПЦР U.urealyticum / U.parvum (биовары)	420
ПЦР Герпес 1/2 (HSV)- кач. ДНК	420
ПЦР Цитомегаловирус кач.	420
ПЦР Вирус Эпштейна-Барр	420
ПЦР Трихомонада	420
ПЦР Гонорея кач.	420
ПЦР Гарднерелла кач. ДНК	420
ПЦР Гарднерелла колич. ДНК	610
Деференциация возбудителя коклюша	610
ПЦР Кандидоз кач. ДНК	420
ПЦР ВПЧ 6/ 11- кач. ДНК	420
ПЦР ВПЧ 6 –кач. ДНК	420
ПЦР ВПЧ ВКР 16- кач ДНК	420
ПЦР ВПЧ ВКР 18- кач ДНК	420
ПЦР ВПЧ 16/ 18- кач ДНК	420
ПЦР ВПЧ ВКР сум- кач ДНК	520
ПЦР ВПЧ ВКР определение типа- кач ДНК	790
ПЦР ВПЧ ВКР без определения типа- колич ДНК	1 190
ЦМВ / ВЭБ /ВПГ 6 типа кач.	850
ВРИ микоплазма / хламидии кач.	550
ПЦР Стрептококк группы В	1 280
ПЦР Стрептококк группы А кач.	900
ANCA –профиль IgG полуколичественный	1 760
NASBA chlamidia trachomatis	2 370
NASBA neisseria gonorrhoeae	2 370
NASBA trichomonas vaginalis	2 370

Ранняя диагностика заболеваний ЭЛИ-ТЕСТ

Наименование услуги	Стоимость
«ЭЛИ-Висцеро-Тест-24» (ранняя диагностика, полная панель) нервной системы, миокарда, печени, почек, надпочечников лёгких, стенок желудка, кишечника, щитовидной железы, поджелудочной железы, простаты, тромбоцитов, эндотелия сосудов, а также к антигенам, характеризующие состояние иммунной системы.	6 950 ₽
«ЭЛИ-В-Тест -6» (общее состояние иммунной системы при подготовке к вакцинации)	2 000 ₽
«ЭЛИ-Диа-Тест-8» (состояние поджелудочной железы, сахарный диабет; общая терапия и эндокринология; уточняющий диагноз и оценка эффективности лечения)	2 100 ₽
«ЭЛИ-ЖКТ- Тест -12» (состояние органов системы пищеварения; гастроэнтерология; общая терапия; гепатология; эндокринология; уточняющий диагноз и оценка эффективности лечения)	2 600 ₽
«ЭЛИ-П-Комплекс-12» (репродуктивное здоровье женщины)	2 840 ₽
«ЭЛИ- Тест-12» (мужское здоровье )	2 640 ₽
«ЭЛИ-АФС-ХГЧ Тест» (антифосфолипидный синдром, анти-ХГЧ синдром, состояние иммунной системы; акушерство и общая терапия; уточняющий диагноз и оценка эффективности лечения)	1 850 ₽
Цитотест. Индивидуальный цитотоксический тест на переносимость 21 химического реагента (консерванты, красители, загустители, ароматизаторы)	5 000 ₽
«ЭЛИ-АНКОР-Тест -12» (состояние сердечнососудистой системы)- предназначен для клинического использования в общей терапии, кардиологии и флебологии для оценки выраженности патологических процессов,нарушающих нормальное функционирование сердечно-сосудистой системы.	2 600 ₽
«ЭЛИ-Н-Тест-12» (состояние нервной системы)	2 600 ₽

Серологические исследования

Наименование услуги	Стоимость
Вирусная диагностика PНK Zika virus, ПЦР (ЭДТА+ слюна+ моча)	4 200 ₽
Вирусная диагностика PНK Zika virus, ПЦР (эякулят)	1 500 ₽
Гепатит А (HAV):
anti- HAV IgG, ИФА, кач.	720 ₽
anti- HAV IgМ, ИФА, кач.	900 ₽
Гепатит B (HBV):
ДНК HBV, кровь, кач. ПЦР	360 ₽
HbsAg, ИФА, кач.	600 ₽
анти- HВsAg, кол.	1 300 ₽
anti- HBc ИФА cуммар., кач.	520 ₽
anti- HBc IgM, ИФА, кач.	850 ₽
HBeAg, ИФА, кач.	720 ₽
Гепатит C (HCV):
РНК HCV, кровь, генотипирование (1a, 1b, 2a, 2b, 3a) ПЦР	1 300 ₽
anti- HСV IgМ, ИФА, кач.	600 ₽
anti- HСV суммарные, ИФА, кач.	400 ₽
РНК HСV , кач.	755 ₽
РНК HСV , кол.	9 190 ₽
Гепатит D (HDV):
anti- HDV IgМ, ИФА, кач.	750 ₽
anti- HDV, ИФА, сумм., кач.	750 ₽
Антимитохондриальные антитела (АМА)	1 450 ₽
Антитела к микросомальной фракции печени и почек (LKM)	1 100 ₽
RW РПГА	520 ₽
Выявление антител к Treponeme pallidum методом РИФ в сыворотке крови	2 910 ₽
Определение антител Treponeme pallidum РИБТ	3 960 ₽
Выявление IgG антител к Treponeme pallidum методом иммуноблокинга (WB) в сыворотке крови	4 100 ₽
Выявление IgM антител к Treponeme pallidum методом иммуноблокинга (WB) в сыворотке крови	4 100 ₽
Выявление антител к Treponeme pallidum в реакции миккропреципитации с кардиолипиновым антигеном (RPR/РМТ) в сыворотке крови	900 ₽
Антитела к Treponeme pallidum (IgM), РПГА	810 ₽
Антитела к Treponeme pallidum (IgG), РПГА	810 ₽
Антитела к бета- клеткам поджелудочной железы	1 330 ₽
Антитела к глутаматдекарбоксилазе (АТ к GAD)	1 450 ₽

Индивидуальный подход к лечению каждого пациента

Использование инновационного оборудования и аппаратуры

Лечение эректильной дисфункции (импотенции) ударно-волновым методом

Полный спектр лабораторной и функциональной диагностики

О клинике «евромедпрестиж»

Специально для сохранения и восстановления здоровья людей в 2000 году была основана
многопрофильная клиника «ЕВРОМЕДПРЕСТИЖ», в которой работают лучшие специалисты из 25 областей
медицины. Наши врачи, в совершенстве владеющие своим ремеслом, готовы бороться с любым Вашим недугом!

Мы заботимся о вашем здоровье с вниманием и любовью и поэтому нас рекомендуют друзьям

Тертичная Светлана Петровна, Главный врач клиники «Евромедпрестиж»

Благодарим Вас
за доверие!

Источник

Команда «Биокор Текнолоджи» разрабатывает тест-системы и наборы для молекулярной диагностики методом ПЦР, и расскажет в этом материале, на какие детали стоит обратить внимание для предотвращения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

ПЦР является универсальным методом лабораторной диагностики, позволяющим идентифицировать даже не собственно вирус или бактерию в биологическом материале, а участки их РНК или ДНК.

Чувствительность ПЦР-анализа приближается к 10-100 копиям генетического материала возбудителя на реакцию. Для сравнения, если человек находится в активной фазе развития заболевания, то его биологический материал содержит миллионы геномов возбудителя на миллилитр, что, после выделения нуклеиновой кислоты будет равно нескольким тысячам копий на реакцию.

В мире, и в Украине в частности, с начала эпидемии COVID-19 ведутся дискуссии относительно того, насколько надежной является такая методика. Одни источники говорят, что ошибочным может быть каждый четвертый тест, другие указывают, что количество ложноположительных и ложноотрицательных результатов составляет лишь несколько процентов. Учитывая актуальность темы, рассмотрим на примере ПЦР для диагностики COVID-19 по каким причинам могут возникать сомнительные или ошибочные результаты. Большинство указанных аспектов имеет место и в случае с ПЦР-тестированием других инфекционных заболеваний человека.

Особенности выбора места для взятия биологического материала

Такие возбудители, как SARS-CoV-2, способны поражать значительное количество органов. Для исследования на COVID-19 обычно берутся мазки из горла или носоглотки, где возбудитель в большом количестве находится ограниченное время — на 5-10 день от начала инфицирования, далее он спускается ниже — к бронхам и легким. Поэтому отрицательный результат ПЦР-теста не может исключать факта инфицирования пациента COVID-19.

С одной стороны, риски получить ложноотрицательный результат ПЦР-теста несколько возрастают на 1-7 день от начала инфицирования, когда количество вируса мало, а также на 10-30 день, когда, во-первых, COVID-19 уже «ушел» ниже, и, во-вторых, в организме уже присутствуют в достаточном количестве антитела, и размножение вируса более или менее эффективно сдерживается иммунной системой. С другой стороны, в некоторых случаях, мы можем получить сомнительно положительный результат ПЦР-теста даже на 60-й день от начала инфицирования, когда человек уже переболел, но в ее биологическом материале все еще можно найти обломки вируса. Все вышесказанное касается только некоторых отдельных случаев и не имеет характера «абсолютной закономерности».

Алгоритм тестирования регламентирован на государственном уровне и, если существует обоснованное подозрение на инфицирование COVID-19, для уточнения диагноза могут проводить ПЦР-анализ повторно.

Неправильное взятие биологического материала

Во избежание ложноположительных результатов вследствие загрязнения — попадание молекул ДНК/РНК из внешней среды, — клинический материал необходимо отбирать стерильными одноразовыми инструментами в одноразовые стерильные пробирки согласно установленным стандартам МОЗ. Взятие материала должны проводить медицинские работники, одетые в средства индивидуальной защиты.

Недостаточное количество биологического материала может привести к ложноотрицательным результатам исследования. В некоторых случаях, эту проблему можно отследить на этапе выделения нуклеиновых кислот или в процессе амплификации (при условии использованием в диагностических наборах для обнаружения SARS-CoV-2 внутреннего контроля, то есть фрагмента генома человека).

Несоблюдение температуры и сроков хранения

Учитывая возможность распада РНК в клиническом материале, сроки хранения и транспортировки должны быть минимальными. В идеальном случае все мазки нужно транспортировать в лабораторию в течение 24-48 часов с момента взятия в специальном транспортной среде при температуре плюс 4 °C. Транспортная среда должна содержать специальные реагенты — муколитики, обеспечивающие разрушение слизи, которая подавляет ПЦР. Если отсутствует возможность своевременно доставить образцы материалов в лабораторию, их можно замораживать до минус 70 °C, используя для этого твердую углекислоту — «сухой лед». Образцы можно хранить в лаборатории в течение недели при температуре минус 20 °C, или до месяца при температуре минус 70 °C. Критическим моментом является количество замораживаний/размораживаний образца: чем их больше, тем ниже качество образца и, вследствие этого, и чувствительность метода в целом.

В результате нахождения образцов в транспортной среде больше срока, рекомендованного производителем, происходит рост естественной бактериальной микрофлоры, которая обычно находится в ротовой полости человека, и разрушение молекул вирусной РНК в образце. При использовании специальных консервантов и стабилизаторов, биоматериал может храниться в температурном диапазоне в соответствии с инструкцией производителя сроком до месяца.

Выделение нуклеиновых кислот

ПЦР-исследование не проводится непосредственно на биологических образцах и требует предварительной пробоподготовки. На этом этапе большое значение имеет качество наборов для экстракции нуклеиновых кислот, которые должны обеспечить выделение образца соответствующей концентрации и степени очистки от примесей, подавляющие ПЦР. Из-за неправильного выбора набора также может быть потеряна часть или даже все РНК возбудителя, что может приводить к ложноотрицательным результатам. Качество и чистоту нуклеиновых кислот можно проверить с помощью специального аналитического прибора — спектрофотометра. Он есть во многих лабораториях, осуществляющих ПЦР-исследования.

Выделенную из образцов РНК можно хранить при температуре минус 20 °C до недели. Для более длительного хранения нужна температура минус 70 °C. Также можно использовать специальные реагенты, стабилизирующие РНК и предупреждают ее деградации (например, DEPC — диэтилпирокарбонат).

Амплификация

Процесс амплификации (увеличение копий участков ДНК, которые обычно содержат необходимые фрагменты целевых генов) может включать до 45 циклов, во время каждого из них количество копий удваивается. Он обеспечивается реагентами, которые входят в диагностические наборы для выявления SARS-CoV-2, и приборами, обеспечивающими циклическую смену температур — амплификаторами.

Для обеспечения корректных результатов, качество диагностических наборов является первоочередным требованием. Также лаборатории должны проводить процедуру их верификации, проведя сравнительные испытания с собственными панелями референтных образцов и решениями от других производителей. Наборы должны поступать в лаборатории в термобоксах с холодовыми блоками и храниться при температуре минус 20 °C. Несоблюдение условий их транспортировки или хранения приводит к повреждению компонентов наборов, и, вследствие того, к ложноотрицательным результатам. Чтобы предупредить эту ошибку, в состав каждого диагностического набора входит положительный контрольный образец, задачей которого является установление работоспособности реагентов.

Диагностические наборы должны быть совместимыми с амплификаторами, используемыми в лаборатории. Реагенты, входящие в состав набора, меченные различными флуоресцентными красителями. Детекция флуоресцентного сигнала от каждого красителя происходит в определенном диапазоне (на определенном «канале»). Если прибор имеет слабую чувствительность по определенным флуоресцентным каналам, это может приводить к ошибочным результатам. Во избежание ошибок работники лабораторий должны проверять исправность работы приборов, а также настройки параметров работы и протоколов амплификации.

Контаминация образцов

При несоблюдении мер безопасности в помещениях лаборатории могут накапливаться продукты амплификации. Это приводит к контаминации образцов, и, в общем итоге, к ложноположительным результатам. Для подтверждения отсутствия загрязнения, каждую серию ПЦР-исследований нужно сопровождать постановкой негативных контрольных образцов, включенных в состав диагностических наборов для выявления SARS-CoV-2.

Перекрестная контаминация может возникать из-за попадания аэрозольных частиц от соседнего образца, содержащего вирусную РНК, при внесении образцов в ПЦР-смесь. На этапе амплификации контаминированный образец издает слабый положительный результат, который означает, что в исследуемой пробе обнаружено очень малое количество вируса. Но такой результат также может указывать, что человека тестировали до наступления полного выздоровления и уровень вируса в его организме был низким.

Способы предупреждения контаминации — использование наконечников с фильтрами, химическая и ультрафиолетовая дезинфекция всех рабочих поверхностей, наличие отдельных наборов дозаторов, оборудования, халатов и перчаток для каждой зоны, проведения внутрилабораторного и внешнего контроля качества исследований — регламентированы на государственном уровне.

Другими эффективными, однако дорогостоящими мероприятиями для предотвращения контаминации является автоматизация этапов выделения нуклеиновых кислот и амплификации, а также двойной контроль — постановка каждого образца в двух параллельных реакциях.

Ошибки обработки данных

Расчеты результатов ПЦР в реальном времени проводятся с использованием компьютерных программ. Амплификатор в автоматическом режиме измеряет интенсивность флуоресценции в образцах на каждом цикле. Кривая амплификации имеет так называемую фазу экспоненциального роста, после которой следует фаза плато. Автоматическая интерпретация результатов не всегда дает правильный результат, поэтому рекомендуется проводить анализ кривых амплификации на предмет пересечения пороговых значений, и корректировать задачи пороговых значений по мере необходимости. Для большей достоверности можно сравнить такую сомнительную кривую с кривой подтвержденного положительного образца.

Подытожим

На каждом этапе исследования являются условия, несоблюдение которых может привести к недостоверным результатам. Некоторые из потенциальных ошибок являются общими для большинства видов лабораторной диагностики (например, ошибки при взятии и хранения образца, настройка оборудования), тогда как другие являются специфическими только для этого вида исследования (например, контаминация образцов, низкое качество выделенных нуклеиновых кислот).

ПЦР — многостадийный метод, и для получения максимально достоверных и воспроизводимых результатов необходимо надлежащее выполнение каждого этапа процесса в соответствии со стандартами МОЗ и инструкциями производителей. Вторым важным условием является качество всех реагентов и расходных материалов, используемых в ПЦР: систем для сбора биологических материалов, наборов для выделения нуклеиновых кислот, диагностических наборов для выявления SARS-CoV-2.

Источник

Полимеразно-цепная реакция, пожалуй, один из самых чувствительных и наиболее точных методов диагностики различных инфекционных заболеваний, особенно, передающихся половым путем. Определяя даже незначительное количество частиц ДНК бактерий, вирусов, грибов, ПЦР является и достаточно специфичным методом, редко дающим ложноположительные результаты.

Ложноположительный результат означает, что на самом деле инфекции нет, а реакция положительная.

Но, даже имея 98-99% точности, при ПЦР иногда также бывают неверные ответы, которые практически никогда не связаны с самой реакцией, а больше с нарушениями на предварительном этапе.

Причины ложноположительного результата анализа ПЦР:

Не выдержаны сроки для проведения контрольных анализов после лечения половых инфекций. Дело в том, что большинство инфекций находятся внутри клеток или фиксированы на поверхности их мембран. Во время полноценного лечения возбудитель ИППП погибает, но частицы его генома (ДНК) остаются еще некоторое время в организме хозяина. Нужно время, порядка 3 недель, чтобы эти клетки заменились на новые, не контактировавшие с инфекционным агентом, тогда и берется контроль. Если же взять анализ раньше, то, благодаря своей высокой чувствительности, ПЦР определит ДНК уже погибших бактерий и укажет на наличие возбудителя, что будет являться ложноположительным, так как инфекция уже погибла.
Наши врачи обладают достаточными знаниями в области диагностики ЗППП и выдерживания сроков, поэтому такие ситуации в клинике Частная практика исключены.
Попадание ДНК инфекций, передающихся половым путем, в пробирку с рук венеролога, с перчаток и урологических зондов.
Данный фактор исключен, так как для забора материала используются только одноразовые перчатки, пробирки и зонды.
Крайне редко встречаются ложноположительные результаты при наличии в соскобе близкородственных микроорганизмом. То есть анализатор выдает наличие патогенной бактерии, вызывающей венерическое заболевание, а на самом деле это компонент нормальной микрофлоры. Но эта проблема уже давно решена внедрением более современных и специфических тест-систем.
Контаминация или занесение ДНК инфекций в пробирку на лабораторном этапе исследования тоже был когда то возможен, но практически исключен правильной организацией процесса диагностики и обучением персонала.

В любом случае диагноз ставится всегда не только на основании результатов одного анализа. Окончательный диагноз заболевания, передающегося половым путем, это совокупность жалоб, клинического осмотра и комбинации различных лабораторных и инструментальных методов.

Если у уролога, гинеколога или венеролога появляются сомнения в правильности полученных результатов ПЦР или выявляется несоответствие имеющейся клинической картины и данных лабораторной диагностики между собой, то врач всегда порекомендует дообследование с применением методов ИФА, НАСБА, посевов, с целью уточнения ситуации.

В наших клиниках есть все доступные современной медицине методики обследования мужчин и женщин. Поэтому установление ложных диагнозов ИППП исключено.

Врач клиники «Частная практика» дерматовенеролог, уролог Волохов Е.А. рассказывает об анализе ПЦР на инфекции.

Содержание статьи проверил и подтвердил на соответствие медицинским стандартам главный врач клиники «Частная Практика»

Волохов Евгений Александрович

дерматовенеролог, уролог-андролог с высшей врачебной категорией

Источник

Ошибки ПЦР

4. Ошибки ПЦР

Выделяют три основных этапа при подготовке и проведении анализа методом ПЦР, в которых наиболее часто допускают ошибки, приводящие к получению ложноположительных и ложноотрицательных результатов:

zПреаналитический этап

zАналитический этап

zПостаналитический этап

4.1.Ошибки преаналитического этапа

Данный этап включает взятие биоматериала, его хранение и транспортировку, пробоподготовку (СП 1.2.036-95, СП 1.3.1285-03 и СП 1.3.2322-08).

4.1.1. Место взятия биологического материала

Впервую очередь, необходимо правильно определить место взятия биологического материала для исследования, а именно: место предполагаемой локализации инфекционного процесса.

Впервую очередь, это касается тех микроорганизмов, для которых известна тропность ко многим видам тканей, например, M.tuberculosis (обусловливает развитие внелегочных форм туберкулеза, в том числе: органов пищеварительной и мочеполовой систем; центральной нервной системы и мозговых оболочек; костей и суставов; кожи; глаз); C.trachomatis (вызывает воспалительные заболевания экстрагенитальной локализации – воспалительные заболевания органов малого таза и брюшины, и восходящий инфекционный процесс – поражения слизистой оболочки матки, труб, яичников, околоматочных связок). Исходя из этого, выбор универсального материала, например, мокроты для выявления кислотоустойчивых микобактерий, либо соскоба из влагалища, цервикального или мочеиспускательного каналов для выявления C.trachomatis может привести к ложноотрицательным результатам в ПЦР.

Кроме того, распространенным, но при этом ошибочным является подход к выявлению спектра патогенных микроорганизмов, особенно возбудителей инфекций, передающихся половым путем (ИППП), в крови пациента. Необходимо учитывать, что для большинства возбудителей ИППП гематогенный путь распространения не является основным, либо не доказан, соответственно, кровь, как материал для исследования, не является пригодной.

Кроме того, даже в случае присутствия в крови отдельных клеток микроорганизмов – возбудителей ИППП, вероятность их обнаружения крайне мала, поскольку оказывается ниже предела чувстви-

тельности стандартных тест-систем.

4.1.2. Правильность взятия биологического материала

Второй распространенной ошибкой преаналитического этапа является неправильное взятие материала на исследование. Даже при правильном определении места взятия материала необходимо учитывать тот факт, что он должен содержать максимальную концентрацию искомых микроорганизмов, а также быть лишен нежелательных примесей, ингибирующих ПЦР.

Основы полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Так при исследовании на наличие внутриклеточных патогенов, проба должна содержать максимальное количество клеток, например, эпителиальных для выявления C.trachomatis, ВПЧ. Для выяв-

ления вируса Эпштейн-Барр (ВЭБ) и цитомегаловируса (ЦМВ) целесообразно использовать лейкоцитарную массу крови. Принципиальным является также стадия заболевания, а именно: осуществляется ли взятие материала в период ремиссии или обострения, что напрямую влияет на концентрацию искомых микроорганизмов в пробе.

Кроме того, необходимо минимизировать количество примесей в пробе, например, слизи, гноя и крови в эпителиальном соскобе, для чего их избыток необходимо удалить стерильным ватным тампоном непосредственно перед взятием образца.

Таким образом, следующей распространенной ошибкой может стать неправильная обработка материала.

4.1.3. Обработка биологического материала

При работе с кровью важно учитывать тот факт, что для предотвращения ее свертывания в процессе доставки необходимо использовать антикоагулянты. Однако, наиболее распространенный антикоагулянт – гепарин является мощным ингибитором ПЦР, поэтому его использование в данном случае недопустимо.

Относительно гепарина следует заметить, что его присутствие в крови у пациентов, находящихся на антикоагулянтной терапии, также может привести к получению недостоверных результатов в ПЦР, поэтому забор крови у таких пациентов рекомендовано проводить до очередного введения препарата.

При необходимости использовать в качестве материала для исследования мочу (клеточный осадок первой порции утренней мочи) важно тщательно промыть пробу физиологическим раствором. Это обусловлено тем, что осадок содержит большое количество солей и мочевины, которые, при ис-

пользовании технологий флуоресцентной детекции, денатурируют зонды, приводя к ложноположительным результатам.

4.1.4. Хранение биологического материала

Принципиальным для получения адекватных результатов ПЦР является хранение биологического материала.

Необходимо помнить о температуре хранения биологического материала, а также сроках и способах его доставки в ПЦР-лабораторию в случае, если транспортировка требует значительного времени. При нарушении сроков хранения или транспортировки биоматериала ДНК или РНК возбудителя могут разрушаться, что приведет к ложноотрицательным результатам. Образцы рекомендуется хранить при температуре от 2 до 8°С в течение 24-48 часов, для более длительного хранения необходимо заморажива-

ние. Единственное исключение – цельная кровь, которая не подлежит замораживанию.

При проведении исследований на наличие вирусов гепатитов В и С, ВИЧ и т.д. необходимо получение плазмы крови, и в этом случае возможно однократное замораживание пробы.

В настоящее время, процессы взятия материала, его предварительной обработки, хранения и перевозки, передачи исследуемого материала в другие организации осуществляются согласно

инструктивно-методическим документам, регламентирующим выполнение исследований для каждого вида возбудителя инфекций, инструкциям к наборам реагентов и в соответствии с СП 1.2.036-95, СП 1.3.1285-03 и СП 1.3.2322-08.

Ошибки ПЦР

4.2. Ошибки аналитического этапа

4.2.1. Выбор системы пробоподготовки

Проведение собственно лабораторного исследования также может сопровождаться рядом ошибок, среди которых одной из основных является неправильный выбор системы пробоподготовки.

Возвращаясь к сказанному выше, наиболее часто в лаборатории используют следующие варианты пробоподготовки:

zЭкспресс-методы – упрощенные методики, основанные на кипячении, протеолизе

zСорбентные методы

zМетоды одновременного выделения ДНК/РНК, выделение из цельной крови

Выбор метода выделения должен определяться характером биоматериала, степенью его загрязнения потенциальными ингибиторами ПЦР.

Использование экспресс-методов существенно сокращает время пробоподготовки, делает минимальными потери ДНК в процессе выделения и существенно сокращает риск кроссконтаминации, что представляется весьма привлекательным для рутинного использования в лаборатории.

Однако, существенным недостатком данной группы методов является низкая степень очистки пробы от ингибиторов, следствием чего 3-5% образцов дают недостоверные результаты в ПЦР.

При необходимости использования экспресс-методов со «сложными» образцами возможно введение дополнительных способов очистки и концентрации материала, например, в случае избытка слизи в пробе (для мокроты и эякулята, бронхоальвеолярного лаважа, промывных вод бронхов, трахеального смыва, синовиальной и плевральной жидкости) целесообразным является ее предварительная обработка муколитиками, типа муколизина.

Тем не менее, даже предварительная обработка материала не подходит для бактерий с крепкой клеточной стенкой и может привести к ложноотрицательным результатам в ПЦР.

Вслучае исследования крови на наличие вирусов, особенно относящихся к группе РНКсодержащих (ВИЧ, гепатит С и т.д.), вероятность получения ложноотрицательных результатов велика по следующим причинам: исходно низкая вирусная нагрузка и течение болезни в периоде ремиссии (концентрация вирусных частиц ниже предела чувствительности тест-системы); неравномерное распределение материала по пробиркам в дублях; нестабильность исходно выделяемой РНК; большие потери материала на этапе пробоподготовки. Повышение эффективности выделения и получение адекватных результатов ПЦР возможно при использовании гемолитика для пред-

варительной обработки цельной крови и увеличения выхода осадка лейкоцитов.

Вданном случае экспресс-методы проявляют крайне низкую эффективность, и наиболее правильным представляется использование сорбентных методов выделения или методов, позволяющих одновременно выделять ДНК/РНК. Данные методы можно определить как «универсальные». Однако для них характерно:

– длительное время выделения;	– опасность кросс-контаминации;
– потери ДНК с сорбентом;	– зависимость от качества сорбента.

Основы полимеразной цепной реакции (ПЦР)

4.2.2. Генетическая изменчивость микроорганизмов

Вероятность получения ложноотрицательного результата может быть обусловлена изменчивостью микроорганизмов. При конструировании тест-системы в качестве мишени используется высоко консервативный участок генома. Однако изменчивость микроорганизмов может приводить к тому, что некоторые генотипы или штаммы исследуемого возбудителя могут приобретать мутации в амплифицируемом участке ДНК и становиться недоступными для анализа данной тест-системой.

Например, у 30% пациентов с установленным диагнозом «хламидиоз», обусловленным С.trachomatis, при проведении исследований методом ПЦР результат анализа был отрицательным при полном соблюдении технологии. Это обусловлено тем, что часть коммерческих тест-систем в качестве мишени использовали плазмиду патогена, тогда как патологический процесс был связан с бесплазмидными штаммами бактерий.

4.2.3. Технологические ошибки

Основной ошибкой аналитического этапа при реализации метода ПЦР с детекцией результатов с помощью гель-электрофореза является риск принять неспецифичные фрагменты за специфичные, если они близки по длине и нет возможности сравнить с К+ и маркером длин фрагментов.

Проблемой, наиболее актуальной для лабораторий, работающих с ПЦР в формате FLASH, является неправильное приготовление фоновых пробирок. В первую очередь, это связано с тем, что в разных сериях реактивов могут отличаться концентрации компонентов реакционной смеси, поэтому высока вероятность различного уровня флуоресценции. Приготовление фоновых пробирок без учета серии тест-системы может привести к большому количеству недостоверных результатов.

Кроме того, при приготовлении фонов необходимо исключить добавление в них полимеразы, так

как, если в тест-систему входит внутренний контроль и/или отрицательный образец проходит стадию выделения, все отрицательные значения будут недостоверными.

Еще одним фактором возникновения ложноположительных и ложноотрицательных результатов в ПЦР с детекцией по конечной точке может быть неправильное хранение фоновых пробирок. Это объясняется тем, что при неправильном хранении зонды в фоновых пробирках могут разрушаться, и нормировочные значения существенно увеличиваются за срок от нескольких часов до нескольких дней, при этом значения флуоресценции в образцах оказываются в большей или меньшей степени занижены.

Главным критерием достоверности полученных результатов в данном случае могут служить отрицательные пробы. При отсутствии расхождений между фоновыми и амплификационными пробирками отрицательные образцы имеют значения флуоресценции близкие к 1 или, в редких случаях, незначительно выше.

Если значения флуоресценции в одном или нескольких образцах или отрицательном контроле существенно ниже 1, с большой долей вероятности можно утверждать, что фоновые пробирки не соответствуют данному исследованию, в этом случае необходимо их поменять.

В случае неправильного хранения амплификационных пробирок (длительное пребывание пробирок при комнатной температуре) фоновая флуоресценция в них возрастает, в то время как в фоновых пробирках флуоресценция остается неизменной. В этом случае увеличивается

Ошибки ПЦР

содержание положительных результатов с низкими значениями флуоресценции. Результаты при этом получаются такие же, как при контаминации в лаборатории, однако в данном случае все низ-

кие значения флуоресценции будут примерно одинаковы, что в случае контаминации встречается достаточно редко, поскольку маловероятно, что во все отрицательные пробирки попадет равное количество постороннего материала.

Несмотря на очевидные преимущества метода ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени, возможны ошибки аналитического этапа, обусловленные следующим: колебанием флуоресценции в приборе, которое может быть зафиксировано программой, как ложноположительный или ложноотрицательный результат. В этом случае необходимо провести анализ индивидуальной кривой. Пороговая линия должна пересекать индивидуальную кривую в области начала экспоненциального роста флуоресценции.

4.3. Ошибки постаналитического этапа

Основной проблемой постаналитического этапа является неверная интерпретация врачом результатов ПЦР-анализа вследствие ошибочных представлений об инфекционном агенте или о возможностях метода.

4.3.1. Ошибки интерпретации результатов ПЦР

Одной из наиболее распространенных ошибок при интерпретации результатов ПЦР-анализа является не принятие во внимание особенностей персистенции и элиминации возбудителя. Например, назначение контрольного исследования через 1 неделю после окончания курса антибиотико-

терапии ряда инфекционного заболеваний. В подавляющем большинстве случаев результат анализа на выявление микроорганизма – возбудителя инфекции будет положительным. Из этого можно сделать вывод о неэффективности проведенной терапии. Такое заключение ошибочно в силу того, что ДНК микроорганизма может сохраняться в течение нескольких недель после его элиминации и не свидетельствует о жизнеспособности. Если речь идет о микроорганизмах, ассоциированных с эпителием, окончательный вывод об излеченности, можно сделать не ранее, чем через 5-6 недель после курса антибиотикотерапии. Это срок необходим для смены эпителиального слоя.

С другой стороны, если целью анализа является оценка состояния микрофлоры урогенитального или желудочно-кишечного трактов, то назначение исследования через 1-2 недели на фоне проведенной антибактериальной терапии, скорее всего, приведет к отрицательному результату в ПЦР. В случае сбалансированной и устойчивой системы, ее самовосстановление произойдет не ранее 2 нед. – 1

месяца, тогда проведение ПЦР анализа будет информативным и позволит оценить динамику состояния, либо определить меры коррекции.

Другая ошибка – клиническая оценка положительного результата ПЦР, определение его прогностической значимости. Показано, что только у 40% – 60% лиц с обнаруженной в крови методом ПЦР ДНК цитомегаловируса клинически может развиться заболевание. В данной ситуации при

оценке результатов исследования, совершается типичная ошибка, заключающаяся в отождествлении двух принципиально различных понятий – «инфицированность» и «инфекционный процесс».

Основы полимеразной цепной реакции (ПЦР)

То же можно сказать и про ПЦР – диагностику инфекций, обусловленных ВПЧ. Метод ПЦР крайне важен с точки зрения возможности идентифицировать отдельные типы ВПЧ (высокого и низкого

онкогенного риска). Однако существует большой риск интерпретировать положительный результат с точки зрения прогноза развития неопластических процессов шейки матки, хотя в 80-90 % случаев инфицирование ВПЧ носит кратковременный характер и заканчивается спонтанной элиминацией вируса (через 6-24 месяца). Положительный результат при лабораторном исследовании имеет значимость, если на фоне ВПЧ – инфекции имеется картина неоплазии эпителия шейки матки, что позволяет прогнозировать степень канцерогенного риска.

Еще одной ошибкой является неверная интерпретация результатов количественного ПЦРанализа. В этом случае необходимо четко определить цель назначения данного вида исследования.

Например, опубликованный в 2010 г УДК [616.36-002.12:578.891]-07/08 «Протокол диагностики и лечения больных вирусными гепатитами В и С» регламентирует количественные исследования ДНК вирусного гепатита В и, в соответствии с рекомендациями Европейской ассоциации по изучению печени 2009 г. (EASL Clinical Practice Guidelines 2009), определяет показания для проведения противовирусной терапии HBV при наличии уровня ДНК HBV в крови более 10 000 копий/мл (2000 ME/мл). Сероконверсия по HBeAg в сочетании со снижением уровня ДНК HBV ниже 2000 МЕ/мл (104 копий/мл) расценивается как достижение эффекта терапии.

Однако, проведение количественных исследований методом ПЦР для целого спектра бактериальных и вирусных инфекций на данный момент не регламентировано и не определены критерии диагностической и клинической значимости получаемых результатов. В связи с этим, интерпретация результатов исследования может носить субъективный характер и определять неверную тактику ведения пациента.

Например, количественный анализ отдельных представителей условно-патогенной флоры урогенитального тракта (Ureaplasma, Gardnerella) без учета количественных показателей ведущего пред-

ставителя нормофлоры – бактерий рода Lactobacillus (обусловливает колонизационную резистентность, поддерживает кислую реакцию среды), а так же при отсутствии клинических проявлений воспаления, дисбиоза и жалоб пациента, может привести к гипердиагностике и необоснованному назначению антибактериальной терапии. Как следствие: стремительный рост антибиотикорезистентности, увеличение числа случаев рецидивирующего бактериального вагиноза и дисбиоза.

Аналогичная ситуация складывается и при интерпретации результатов количественного исследования ВПЧ высокого онкогенного риска. На сегодняшний день отсутствует прямое доказательство роли исходной вирусной нагрузки в развитии неопластических процессов шейки матки и прогнозировании их исхода.

Кроме того, на этапе анализа и интерпретации результатов ПЦР возникают и другие проблемы, которые можно обозначить, как несовпадение результатов при использовании различных методов

исследования (например, ПЦР и ИФА, ПЦР и бактериальный посев, ПЦР и микроскопические методы исследования).

4.3.2. Сравнение результатов ПЦР и ИФА

В случае сравнения результатов, полученных в ИФА и ПЦР, несовпадения могут быть следующими:

zположительный результат в ПЦР и отрицательный результат в ИФА;

zотрицательный результат ПЦР и положительный результат ИФА.

Ошибки ПЦР

В первом случае, и это наиболее актуально для выявления вирусов гепатита С и иммунодефицита человека, данный факт может быть обусловлен наличием «серологического окна». В усло-

виях постоянно повышающихся концентраций антигена в результате репродукции вируса происходит активное снижение концентрации антител за счёт включения их в состав иммунных комплексов «антиген-антитело». Также происходит подавление гуморального звена иммунного ответа в результате синтеза набора цитокинов, стимулирующих клеточное звено иммунитета. Как следствие, в течение инфекционного процесса наблюдается длительное «серологическое окно» от момента заражения до сероконверсии.

Обычно заметное количество антител к ВИЧ появляется в крови через 2-10 недель после заражения, однако разброс во времени может быть весьма велик. Так, у 90-95 % зараженных они обнаруживаются в течение 3-х месяцев после заражения, у 5-9 % – через 6 месяцев, а у 0,5-1 % – и в более поздние сроки.

Выявление ДНК/РНК вируса методом ПЦР позволяет уменьшить продолжительность «серологического окна» в среднем на 11 дней и обнаружить патогена уже через 1-2 недели после заражения.

Проведение ПЦР позволяет выявить РНК вируса гепатита С не только в сыворотке крови, но и в биоптате печени, что важно при подтверждении роли вируса гепатита С в формировании гепатоцеллюлярной карциномы. У подобных больных РНК вируса гепатита С регистрируется в гепатоцитах и при отсутствии anti-HCV и РНК вируса гепатита С – в сыворотке крови. У ряда больных с самоограничивающимся течением инфекции anti-HCV не появляются никогда.

Кроме того, отсутствие положительных результатов ИФА на фоне положительного результата в ПЦР может наблюдаться у иммуносупрессированных пациентов и новорожденных с перинатальной инфекцией (нетипичная картина, связанная с антителами матери). Так, при хроническом хламидиозе до 5% больных имеют титр антихламидийных антител, не превышающий критическо-

го уровня.

Аналогичная проблема может возникнуть при диагностике сифилиса, в том случае, если заболевание проходит стадию первичного серонегативного сифилиса, когда стандартные серологические реакции крови еще отрицательные (первые 3-4 недели от возникновения твердого шанкра).

При заболеваниях, передающихся половым путем, скрытый период инфекции, когда уровень иммуноглобулинов не больше нормы, составляет в среднем 14 дней.

Кроме того, важно учитывать возможность высокой генетической изменчивости микроорганизмов, которая приводит к формированию серонегативных штаммов.

При обследовании новорожденных на наличие внутриутробных инфекций может быть получен ложноотрицательный результат серологического исследования не только вследствие влияния высокой концентрации материнских антител класса IgG (маскируют наличие IgM у ребенка), но и развития иммунологической толерантности.

Иммунологическая толерантность – неспособность организма к иммунному ответу на определенный антиген. Сроки ее формирования варьируют от нескольких часов до нескольких суток, а ее длительность зависит от персистенции антигена в организме и скорости образования иммунокомпетент-

ных клеток из их предшественников. Индукции толерантности способствует неспецифическая иммунодепрессия (в том числе, под влиянием лекарственных препаратов).

Основы полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Генетически обусловленная серонегативность ряда заболеваний делает их недоступными для анализа стандартными серологическими методами, а при исследовании методом ПЦР обеспечивается положительный результат, например, серонегативные спондилоартриты (ССА) – заболевания, которые характеризуются поражением крестцово-подвздошных сочленений и имеют тенденцию к семейной агрегации. В группу ССА включают 10 заболеваний: идиопатический анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит, болезнь Рейтера, язвенный колит, болезнь Крона, болезнь Уиппла, ювенильный хронический артрит, реактивный артрит (иерсиниозный, шигеллезный, сальмонеллезный), острый передний увеит, синдром Бехчета, объединенных наличием при обследовании HLA-B27 – антигена.

Еще один вариант несовпадения результатов ПЦР и ИФА (отрицательный результат в ПЦР и положительный результат в ИФА) может быть обусловлен выявлением «иммунологического следа» – остаточный уровень IgG после ранее перенесенной инфекции. У некоторых людей повышенный уровень антител может сохраняться многие месяцы и годы после полного выздоровления, что связано с индивидуальными особенностями иммунной системы.

Другой причиной расхождения результатов может стать использование родоспецифических тест-систем для ИФА.

Например, в случае подозрений на атипичную пневмонию выбор тест-системы, выявляющей несколько видов хламидий, в первую очередь, респираторных (С. pneumonia, C. pecorum, C. рsitaci), определяет получение положительного результата. При этом, направление на анализ методом ПЦР с указанием только наиболее распространенного этиологического агента хламидийной пневмонии – С. рneumonia может привести к получению отрицательного результата. Это будет связано с использованием видоспецифической тест-системы, направленной на выявление только указанного вида микроорганизма, тогда как возбудителем инфекционного процес-

са может быть C. рsitaci.

Еще одним фактором несовпадения данных ПЦР и ИФА является зависимость результатов анализа методом ПЦР от используемого материала.

Материал для ПЦР должен быть получен из места предполагаемой локализации инфекционного и/или неинфекционного воспалительного процесса, а для получения достоверного результата ИФА данный подход не является критичным.

Например, при хламидийном сальпингите (воспаление маточной трубы) в крови пациентов будет определяться устойчивый уровень специфических антител, тогда как при анализе соскобного материала из влагалища или шейки матки методом ПЦР хламидии обнаружены не будут. Учитывая тот факт, что в 50% случаев заболевание протекает атипично интерпретация результата ПЦР как отрицательного, может привести к тяжелым последствиям, поэтому для подтверждения положительного результата ИФА и постановки диагноза показана лапароскопия (гидросальпинкс).

Тем не менее, сравнивая возможности ИФА и ПЦР в диагностике заболеваний, следует отметить, что метод ПЦР не позволяет установить стадию инфекционного процесса. В связи с этим, роль ИФА в интерпретации результатов исследования может быть весьма существенной, поскольку данный метод позволяет определить авидность антител.

Ошибки ПЦР

Авидность – это прочность связи между антителом и антигеном, которая отражает сроки заражения и длительность инфекционного процесса. Определение индекса авидности (ИА) ниже 30-35%

указывает на свежую первичную инфекцию, показатель авидности, равный или превышающий 40%, указывает на то, что в сыворотке содержатся анамнестические высоко-авидные антитела, свидетельствующие об инфекции в прошлом. ИА в интервале 31-39% может свидетельствовать о поздней стадии первичной инфекции или недавно перенесенной инфекции только при условии выявления антител в высокой концентрации.

4.3.3. Сравнение результатов ПЦР и микроскопии

На данный момент микроскопические методы исследования широко применяют в диагностике инфекционных болезней бактериальной этиологии, паразитарных и (реже) вирусных заболеваний.

В повседневной практике лаборатории микроскопическое исследование, как правило, используют для ускоренной ориентировочной диагностики.

Основные задачи микроскопии:

zвыявление возбудителя в клиническом материале;

zориентировочная идентификация на основе определения характерных морфологических и тинкториальных признаков микроорганизмов;

zизучение окрашенных мазков из колоний чистых культур.

Этот метод рассматривается, как самый быстрый и дешевый, его использование связано с мини-

мальными требованиями к организации лаборатории.

Тем не менее, существует ряд ограничений в использования микроскопии для диагностики инфекционных заболеваний:

zнизкая чувствительность;

zсубъективность оценки результатов;

zограниченный спектр выявляемых микроорганизмов;

zприблизительная количественная оценка.

Так, при диагностике трихомониаза микроскопический метод имеет самую низкую чувствительность: в среднем – 30% (для женщин – 50-60%, для мужчин – 10-12%), тогда как метод ПЦР достоверно определяет возбудителя в 90-96% случаев. Такие показатели микроскопии обусловлены потерей микроорганизмом характерной подвижности после извлечения во внешнюю среду.

Особенно затруднительна диагностика в случае низкотитражных препаратов или препаратов, содержащих значительное количество клеток эпителия и лейкоцитов. В очаге воспаления трихомонада часто представлена округлыми формами, напоминающими полиморфноядерные лейкоциты, кро-

ме того, типичные морфологические признаки теряются во время фиксации и окрашивания, создавая трудность для этиологической идентификации.

Сравнение чувствительности микроскопических методов исследования и ПЦР применительно к таким микроорганизмам, как N.gonorhoeae и C.trachomatis, свидетельствует, что в первом случае частота выявляемости патогена в микроскопии у мужчин – 80-95%, у женщин – 30-50%, а во вто-

ром – 10-12%. При этом, использование метода ПЦР дает возможность определять указанные микроорганизмы с чувствительность более 95%.

Основы полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Микроскопия микроорганизмов в нативном состоянии (главным образом фазово-контрастная) имеет ограниченное применение, главным образом, при выявлении их подвижности и изучении мор-

фологии микроорганизмов, лишенных клеточной стенки (микоплазм и L-форм бактерий).

L-формы – бактерии, частично или полностью лишённые клеточной стенки, но сохранившие способность к развитию. Возникают спонтанно или индуцировано – под воздействием агентов, блокирующих синтез клеточной стенки: антибиотиков, ферментов, ультрафиолетовых и рентгеновских лучей,

аминокислоты глицина.
L-форма обнаружена у патогенных видов холер-
ного вибриона, токсигенных штаммов Clostridium
tetani, Treponema pallidum (рис. 9). L-формы неред-
ко обнаруживаются в организме при таких длитель-
но протекающих патологических процессах, как бру-
целлез, септический эндокардит.
Важно учитывать, что существенным ограничени-
ем микроскопических исследований является также
использование их для количественного анализа. На-
пример, анализ состояния биоценоза урогенитально-
го тракта предусматривает количественное опреде-
ление широкого спектра условно-патогенных аэроб-
ных и анаэробных микроорганизмов, для которых
доказана роль в развитии воспалительных процес-	Рис. 9. Treponema pallidum,
сов органов малого таза на фоне снижения количе-
ства ключевого представителя нормофлоры – бакте-	штамм Никольса (1),
рий рода Lactobacillus.	инцистированная трепонема (2),
Традиционно при световой микроскопии выяв-	ультраструктура L-форм трепонемы (3).
ляют не более 10 морфотипов: Lactobacillus spp.,

Gardnerella vaginalis, Bacteroides spp., Mobiluncus spp., Fusobacterium spp., Leptotrihia spp., Veillonella spp., Candida spp. При этом морфотипы факультативно-анаэробных бактерий, обнаруживаемых в мазках, морфологически однотипны у многих видов и родов бактерий – колиформные палочки или грамположительные кокки.

Например, Atopobium vaginae не имеет специфических микроскопических признаков, как G.vaginalis и Mobiluncus spp., и выглядит под микроскопом как обычная коринобактерия, довольно часто встречающаяся у здоровых женщин. При этом данный микроорганизм является одним из основных факторов развития рецидивирующего бактериального вагиноза и его осложнений.

Кроме того, при микроскопии мазков можно выявить микроорганизмы, присутствующие в биоматериале в количестве, обычно превышающем 105 КОЕ/мл, тогда как многие факультативноанаэробные и аэробные бактерии могут проявлять патогенный эффект при сравнительно неболь-

шом их количестве (до 104 КОЕ/мл), которое не выявляется при микроскопии. Поэтому диагностическая ценность микроскопического исследования вагинального отделяемого резко снижается.

Соседние файлы в предмете Молекулярная биология

#
#
19.10.202028.35 Mб24Льюин Б. — Гены (2012, 9-е издание)_copy.djvu
#
#
#
16.09.202019.92 Mб55Попов В.В. Геномика с молекулярно-генетическими основами.pdf
#

Источник

Укажите основные причины ошибок метода пцр

Возможны ли ошибки в ПЦР-диагностике? Ложноотрицательные и ложноположительные результаты ПЦР

Особенности выбора места для взятия биологического материала

Неправильное взятие биологического материала

Несоблюдение температуры и сроков хранения

Выделение нуклеиновых кислот

Амплификация

Контаминация образцов

Ошибки обработки данных

Подытожим

А вот еще интересные материалы: