Возможные ошибки
Определение групповой принадлежности
с помощью реакции агглютинации может
сопровождаться ошибками, ведущими к
неверной трактовке результатов.
Все ошибки можно разделить на три группы:
• низкое качество реагентов;
• технические ошибки;
• особенности исследуемой крови.
Низкое качество реагентов
Стандартные изогемагглютинирующие
сыворотки и стандартные эритроциты
могут иметь низкие агглютинабельные
свойства, что приводит к неверному
толкованию результатов реакции. Во
избежание подобных ошибок нужно следить
за сроком годности, условиями хранения
и внешним видом реагента (прозрачность
сыворотки, отсутствие плёнок, хлопьев,
запаха гниения и пр.).
Технические ошибки
Ошибки технического характера связаны
с несоблюдением или недостаточно точным
выполнением всех правил проведения
реакции.
Несоблюдение внешних условий
Плохая освещённость мешает обнаружить
агглютинацию или её отсутствие.
Повышение температуры выше 25 °С резко
замедляет реакцию.
При низкой температуре (ниже 15 °С) может
произойти неспецифическая агглютинация,
независимо от состава агглютининов и
агглютиногенов — так называемая холодовая
панагглютинация (агглютинация
возникает при реакциях с сыворотками
всех групп крови). Это происходит из-за
наличия в сыворотке особого холодового
агглютинина, способного давать реакцию
агглютинации только при низких
температурах.
Неправильное проведение самой реакции
Нарушение расположения сывороток,
соотношения сыворотки и крови, слияние
соседних капель создают возможность
неправильной интерпретации полученных
результатов.
Ранняя оценка результатов также может
привести к ошибке, особенно при наличии
слабого антигена А2, дающего
позднюю агглютинацию.
Недобавление физиологического раствора.
Несоблюдение этого простого правила
(в капли, где произошла агглютинация,
следует добавить изотонический раствор
хлорида натрия) может привести к тому,
что за специфическую агглютинацию
принимают ложную (псевдоагглютинацию).
Под термином «псевдоагглютинация»
подразумевают способность эритроцитов
склеиваться в «монетные столбики», или
«кучки», с сохранением мембран, независимо
от их агглютинабельных свойств. Границы
между форменными элементами хорошо
видны под микроскопом, в отличие от
истинной агглютинации, при которой
происходит разрушение мембран эритроцитов.
Добавление 1-2 капель изотонического
раствора хлорида натрия позволяет
дифференцировать истинную агглютинацию
от ложной. Псевдоагглютинация расходится
довольно быстро, в то время как истинная
агглютинация сохраняется прежней или
становится более выраженной.
Особенности исследуемой крови
Развитие неспецифической панагглютинации
может быть связано не только с низкой
температурой, но и с качествами самой
крови.
Панагглютинацию при бактериальном
заражении исследуемой крови в 1927 г.
описал Томсен. Этот феномен (феномен
Томсена) характеризуется агглютинацией
крови с сыворотками всех групп и
сывороткой собственной крови.
Сущность явления заключается в том, что
сыворотка при комнатной температуре
даёт агглютинацию со всеми эритроцитами,
даже со своими собственными
(аутоагглютинация), а эритроциты в то
же время дают агглютинацию со всеми
сыворотками, даже с сыворотками группы
AB(IV).
Подобное явление описано при различных
заболеваниях: болезнях крови, спленомегалии,
циррозе печени, инфекционных заболеваниях
и т.д. Панагглютинацию крайне редко
наблюдают и у здоровых людей. Панагглютинацию
и аутоагглютинацию выявляют только при
комнатной температуре; при температуре,
близкой к температуре человеческого
тела, этих явлений не происходит.
Во избежание ошибок необходимо не
допускать определения группы крови при
температуре ниже 15 ?С. Если при определении
групповой принадлежности агглютинация
происходит с сыворотками групп 0(I), A(II)
и B(III) всегда следует проводить реакцию
с сывороткой группы AB(IV). Только в том
случае, если в этой капле не будет
агглютинации, можно исключить
панагглютинацию и отнести кровь к группе
AB0(IV). При наличии агглютинации с
сывороткой AB(IV) необходимо подогреть
кровь до 37 ?С и провести реакцию при этой
температуре, при этом панагглютинация
и аутоагглютинация исчезают.
При некоторых заболеваниях отмечают
снижение агглютинабельности агглютиногенов
эритроцитов (хронические инфекционные
заболевания, онкологические заболевания,
болезни крови и др.). При этом так же, как
и при наличии слабого антигена A2,
следует чётко соблюдать условия и время
реакции.
Во всех случаях нечёткого или
сомнительного результата необходимо
повторное определение группы крови при
помощи стандартных сывороток других
серий, а также перекрёстным способом.
Соседние файлы в папке Общая хирургия. Петров
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
«Некоторые особенности выявления неспецифической агглютинации при типировании крови по системе АВ0», 2007г., Е.П. Понамарева, Н.М. Портнова
МОДЕРНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОВРЕМЕННЫЕ ВОПРОСЫ ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЫ:
материалы 42-й научно- практической межрегиональной конференции врачей
Ульяновской области. 2007год.
Е.П. Понамарева, Н.М. Портнова
«НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ ВЫЯВЛЕНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ АГГЛЮТИНАЦИИ ПРИ ТИПИРОВАНИИ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВО»
Учение о группах крови легло в основу научной и практической разработки метода переливания крови, позволив объяснить явления совместимости или несовместимости крови донора и реципиента. Групповая система АВО явилась первой открытой изосерологической системой крови человека, кроме которой есть много групповых систем, имеющих значение в клинической практике. Под групповыми (изосерологическими) системами крови человека подразумевается определенные сочетания отдельных антигенных свойств эритроцитов (групповых факторов) и антител по отношению к ним, находящимся в плазме крови. Наличие антигенов и их сочетаний являются постоянной характеристикой крови человека, в то время как наличие антител в норме, характерно только для некоторых систем, главным образом для групповой системы АВО.
Правильность определения групповой принадлежности крови донора и реципиента имеет большое значение в предотвращении посттрансфузион-ного осложнения гемолитического типа. Ошибки в типировании антигенов эритроцитов системы АВО могут быть обусловлены как техническими погрешностями, так и индивидуальными особенностями исследуемой крови и недостаточно высоким качеством применяемых реактивов. Во избежания ошибок считается обязательное определение группы крови как донора, так и реципиента в лабораториях проводить перекрестным способом с использованием стандартных эритроцитов 0(I), А(II), B(III) и стандартных изоге-магглютинирующих сывороток или цоликлонов, с учетом специфических агглютинации (реакции склеивания эритроцитов).
При исследовании групповой принадлежности крови по системе АВО у доноров и больных могут наблюдаться отклонения от обычной картины агглютинации. Это выражается в отсутствии специфической или наличии неспецифической агглютинации, а также несовпадения результатов исследования по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам. Чаще всего затруднения связаны с присутствием в исследуемой крови аутоантител или аллоантител в сыворотке и искажают результаты АВО — типирования. Дополнительное исследование сывороток с произвольно взятыми образцами эритроцитов может показать какими антителами обусловлена агглютинация — специфическими или неспецифическими. Неспецифическая холодовая агглютинация проявляется в том, что антитела агглютинируют любые образцы эритроцитов, независимо от типа антигенов. По законам изоагглютиннации сыворотка никогда не содержит изоагглютининов, способных реагировать с эритроцитами той же самой крови. Однако клинические и экспериментальные наблюдения показывают, что аутоагглютинация иногда встречается, как патологическое явление при некоторых заболеваниях человека: при сердечно — сосудистых заболеваниях, онкологических, гематологических, заболеваниях печени, туберкулезе, сифилисе, малярии, ожоговой болезни и т. д.
Аутогглютинация заключается в том, что эритроциты склеиваются в «кучки» не в самом организме, а по извлечению крови и охлаждении ее до температуры окружающей среды, без прибавления к ней каких-либо сывороток или реактивов и идентична со складыванием эритроцитов в «монетные столбики». Наклонность эритроцитов к образованию «монетных столбиков» существует вообще во всякой крови и усиливается при патологических условиях, так что «столбики» могут быстро превращаться в неправильные массы, однако это не есть истинная агглютинация. По существу аутоагглютинация и образование «монетных столбиков» (гемоимпиляция) одно и то же и различаются между собой только интенсивностью, а с кровяными группами ничего общего не имеют. Известно также, что в нормальной крови гемоимпиляция может отмечаться такой интенсивностью, что симулирует изоагглютинацию (так называемая псевдоагглютинация). В практике наблюдается еще разновидность неспецифической агглютинации, когда сыворотка склеивает любые эритроциты: при понижении температуры до 8-100 С (холодовые агглютинины) и при комнатной температуре, исчезает склеивание при повышении температуре до 22-250 С. Все эти явления не имеют отношения к истинной агглютинации и носят общее название «панагглютинация», что может быть одним из источников ошибок при определении группы крови по системе АВО.
Неспецифические холодовые антитела мало опасны для донора и больного. Однако они могут блокировать т. е. маскировать одновременно присутствующие в сыворотке крови специфические антитела, имеющие значение при подборе крови для трансфузии.
В практической деятельности группы апробации крови областной станции переливания крови отмечается тенденция роста выявления неспецифических гемагглютинаций (НГА) при типировании доноров по системе АВО. За последние годы, в диапазоне от 35000 до 40000 исследований в год, выявлены следующие цифры неспецифических гемагглютинаций: 1996 год 334, 1997 год – 558,1998 год – 810,1999 год — 1742, 2000 год – 1291,2001 год 1407, 2002 год — 1116, 2003 год – 1090, 2004 год — 1246, 2005 год — 1335, 2006 год — 1494.
Имеют место факты повторяющихся НГА у доноров, впоследствии у которых обнаруживается инфекционное заболевание. НГА совпадают с перестановкой крови доноров на маркеры гепатитов, сифилиса, ВИЧ-инфекции. Так в 2005 году 49 совпадений перестановки результатов исследований
— подтверждено 18 инфекционных заболеваний, в 2006 году из 32 совпадений — подтверждено 5 инфекционных заболеваний. Это свидетельствует о том, что доноры (практически — здоровые люди) попадают на кроводачу в серонегативном периоде инфекционного заболевания или уже болея, но еще не зная об этом. В беседах с донорами выясняются и другие факторы влияющие на появление у них НГА: экологическая обстановка региона, социальные условия труда и быта и патологические состояния организма.
Правильность типирования доноров и реципиентов по системе АВО имеет большое значение в профилактике посттрансфузионных осложнений гемолитического и негемолитического типа, на станции переливания крови проводятся дополнительные исследования антигенов эритроцитов и сывороточных белков крови человека. Так как при наличии неспецифических гемагглютининов, плазма в лечебную сеть не выдается, а направляется на фракционирование с целью получения белковых препаратов.
Проводимая работа выполняется для улучшения качества выпускаемой продукции.
/
Ошибки при определении групп крови
Регистрационные удостоверения
Разновидности ошибок при определении групп крови: технические, вызванные применением некачественных реагентов, обусловленные биологическими особенностями анализируемых образцов.
Технические причины
- Некорректное расположение реагентов на планшете.
- Нарушение количественного отношения цоликлонов и эритроцитов.
- Недостаточная стерильность планшетов и пипеток.
- Неверная запись в историю болезни.
- Несоблюдение времени реакции агглютинации. В случае ожидания менее 5 минут реакция может не наступить при наличии слабых агглютиногенов. При передержанной реакции подсыхание капель с краев может симулировать ложноположительный результат.
- Температура воздуха свыше 25 °C. Рекомендуется использовать специальные реагенты с поправкой на температурные условия, опускать внешнюю часть планшета в холодную воду.
- Недостаточное или избыточное центрифугирование. В первом случае возможны ложноположительные результаты, во втором – ложноотрицательные.
Низкое качество реагентов
- Титр цоликлонов менее 1:32, использование просроченных реагентов вызывают позднюю или слабо выраженную реакцию.
- Загрязнение и недостаточная консервация цоликлонов и стандартных эритроцитов вызывает «бактериальную» агглютинацию.
Биологические особенности эритроцитов
- Слабые формы антигенов эритроцитов вызывают позднюю и слабо выраженную агглютинацию. Во избежание ошибок определения групп крови осуществляют повторное исследование с другой серией цоликлонов и увеличенным временем реакции, применяют моноклональные антитела Анти-Aсл., проводят типирование перекрестным способом со стандартными эритроцитами.
- «Панагглютинация» вызывает неспецифическую агглютинацию со всеми сыворотками. Онкологические и гематологические пациенты попадают в группу риска. Для устранения «аутоагглютинации» используют трехкратное отмывание эритроцитов. Планшет прогревают в течение 5 минут в термостате при 37 °C. В ряде случаев предварительно подогревают пробирку, реактивы, раствор NaCl.
- «Монетные столбики» эритроцитов. По окончании исследования в поле реакции рекомендуется добавить 1 – 2 капли 0,9 % раствора NaCl и покачать планшет.
- Неполная агглютинация. Частичная агглютинация эритроцитов может возникать после пересадки пациенту костного мозга или в первые месяцы после трансфузии крови 0(I). Для окончательного типирования антигенов по системам AB0 и Резус рекомендуется использование ID-гелевых карт.
Биологические особенности антител
- Выявление иммунных антител, возникших в результате предшествующей сенсибилизации. Больному с иммунными антителами требуется индивидуальный подбор донора.
- Возникновение «монетных столбиков». Сомнительный результат подтверждают со стандартными эритроцитами 0(I). Для распознавания истинной агглютинации добавляют изотонический раствор и покачивают планшет.
- Отсутствие Анти-A и Анти-B-антител. Встречается у младенцев и больных с угнетением гуморального иммунитета.
- Присутствие в сыворотке специфических и неспецифических холодовых антител. В случае наличия неспецифических агглютининов агглютинация пропадает во время проведения исследования при 37 °C. Взаимодействие сыворотки со стандартными эритроцитами 0(I) говорит о присутствии специфических холодовых антител. Специфичность антител определяется с помощью типированных по системам P и MNS эритроцитов.
Список литературы
- Рагимов, А.А. Трансфузионная иммунология/А.А. Рагимов, Н.Г. Дашкова. — М.: Медицинское информационное агентство, 2004. — 279 с.
- Шевченко, Ю.Л. Безопасное переливание крови/Ю.Л. Шевченко, Е.Б. Жибурт. — СПб.: Питер, 2000. — 308 с.
Патенты
Галерея 1

Планшет для типирования крови человека по антигенам эритроцитов
Регистрационное удостоверение на медицинское изделие. ТУ 22.29.29−001−06125010−2017. № РЗН 2018/6730 от 02 марта 2020 года

Планшет для типирования крови человека по антигенам эритроцитов
Приложение к регистрационному удостоверению на медицинское изделие. ТУ 22.29.29−001−06125010−2017. № РЗН 2018/6730 от 02 марта 2020 года

Набор реагентов для изосерологических исследований in vitro (Иммуногем-Сангвитест)
Регистрационное удостоверение на медицинское изделие. ТУ 21.20.23-002-06125010-2018. № РЗН 2019/8361 от 02 марта 2020 года

Набор реагентов для изосерологических исследований in vitro (Иммуногем-Сангвитест)
Приложение к регистрационному удостоверению на медицинское изделие. ТУ 21.20.23-002-06125010-2018. № РЗН 2019/8361 от 02 марта 2020 года
Галерея 2

Патент на промышленный образец 105908
Планшет для типирования крови человека по антигенам эритроцитов. Патентообладатель, автор: Чмелев Вадим Мстиславович, генеральный директор ООО

Патент на промышленный образец 109688
Планшет для типирования крови человека по антигенам эритроцитов. Патентообладатель, автор: Чмелев Вадим Мстиславович

Патент на промышленный образец 109689
Планшет для типирования крови человека по антигенам эритроцитов. Патентообладатель, автор: Чмелев Вадим Мстиславович