Ошибки при определении группы крови цоликлонами

Галерея 1

Галерея 2

Выводы:

У детей вакцинированных эпидемическим паротитом по индивидуальному плану наблюдается вторичная иммунологическая недостаточность с угнетением клеточного звена и поликлональной активацией гуморального звена иммунитета.

Изучение иммунного статуса у детей, получавших вакцинацию по индивидуальному плану диктует необходимость разработки эффективных методов оздоровления с включением в комплекс лечения имунокоррегирующей терапии.

Список литературы

1. Зверевв В., Юминова Н.В. Эффективность вакцинации против кори и эпидемического паротита, Инф. бюл. Вакцинация 2000; 11 (5):10-1.

2. Назиров Ф.Г. Состояние и перспективы развития педиатрической службы в свете реализации государственных программ реформирования здравоохранения и «Здоровое поколение». Журн. Педиатрия №2-3. -2000. С. 8-11.

3. Семенов Б.Ф., Баранов А.А. Вакцинопрофилактика при нарушениях здоровья. М.Мсоюз педиатров России. 2001.

4. Флетчер Р., Флетчер С., Вангер Э. Клиническая эпидемиология (основы доказательной медицины), М., Медиа Сфера, 1998; 345.

5. ЯрцевМ.Н., ЯковлеваК.П. Физиология и патология иммунной системы. 2004; 2: 11-9.

6. Toscani L., et al: Comparison of the efficacy of various mumps vaccine strains: Buckley R.H. J Allergy ClinImmunol 2002; 109: 747-57.

ПРИЧИНЫ ОШИБОК ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ И МЕРЫ ИХ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ

Лунина Г.В.

Лунина Галина Владимировна — врач, клиническая лаборатория диагностики, Отдел контроля качества и клинической лабораторной диагностики, Центр крови Белгородской области г. Белгород ОЗК №3, г. Губкин

Ошибки при определении группы крови, возникают при нарушении техники выполнения исследования или в случае трудноопределимых групп крови.

1. Технические ошибки:

• ошибочный порядок расположения реагентов;

• использование сывороток с истёкшем сроком годности;

• использование инфицированных сывороток;

• использование сывороток с титром ниже 32;

• использование одной палочки при смешивании сывороток разных групп и крови;

• нарушение соотношения между стандартными сыворотками и исследуемых эритроцитов (эритроцитов должно быть в 5-10 раз меньше, чем сыворотки);

• нарушение соотношений между эритроцитами и моноклональными реагентами (цоликлоны) (2-3:10)

• не соблюдение температурного режима (не ниже 15°С и не выше 25°С);

• преждевременная оценка результатов (ранее 5 минут);

• за агглютинацию принимают монетные столбики, если не добавляется 0,9% раствор хлорида натрия;

• недостаточно высокое качество используемых для исследования реагентов.

2. Ошибки биологического характера:

• способность эритроцитов давать агглютинацию со всеми стандартными сыворотками;

• у людей с заболеванием крови, печени, почек, хроническими процессами возможен процесс агглютинации эритроцитов с собственной сывороткой (для исключения ошибки тарелку поставить в термостат при 37°С на 5-6 минут);

• полная панагглютинация- необходимо исследовать агглютинины А и В в слюне;

• феномен Томпсона — инфицированная кровь даёт неспецифическую агглютинацию;

• у новорожденных агглютиногены А и В не достаточно активны и поэтому исследования должны проводиться с сыворотками с высоким титром антител;

• слабые агглютиногены А2, А3;

3. Трудноопределяемые группы крови.

Антиген А нельзя считать однородным, существует два основных его подтипа: А! и А2. Эритроциты с подтипом агглютиногена А! встречают намного чаще, чем с подтипом А2 (88% и 12% соответственно). В соответствии с этим группа А(П) имеет две подгруппы: А(П) и А2(П), а группа АВ(1У) — АВ(1У) и А2В(1У) (Таблица 1.).

Таблица 1. Трудноопределяемые группы крови

Группа Подгруппа Агглютиногены в эритроцитах Агглютинины в сыворотке крови Распространённость

0аР нет нет а и в 33,5%

Ар (II) А1(П) А2(П) А1 В1 в (а2- крайне редко) Р(аг в 20% случаев) 32,1% 5,7%

Ва(Ш) нет В а 20,6%

АВо(^) АВ(1У) А2В(1У) А1 и В А2 и В нет (а2- крайне редко) нет(аг в 20% случаев) 6,8% 1,3%

Группы крови по системе АВ0

Агглютиноген А j и А2 отличаются друг от друга по свойствам.

• подтип А1 обладает большей адсорбционной возможностью по сравнению с агглютиногеном А2, он сильнее адсорбирует агглютинин а из сыворотки, поэтому его называют сильным, а подтип А2 — слабым.

• эритроциты с агглютиногеном А2 имеют более низкую агглютинабельность.

• подгруппы с агглютиногенами А1 и А2 обладают различными свойствами сывороток. Сыворотка подгрупп А2 (II) и А2В (IV) довольно часто содержит агглютинин, названный Ландштейнером и Левином экстраагглютинином aj, дающим агглютинацию только с эритроцитами А1 и не дающим агглютинации с эритроцитами А2. В то же время в сыворотке подгрупп A(II) и AB(IV) довольно редко, но встречается экстраагглютинин a2, не агглютинирующий эритроциты Aj, а дающий агглютинацию с эритроцитами А2.

Существуют варианты эритроцитов с ещё более слабовыраженными агглютинабельными свойствами, что связано с наличием в них подтипов А3, А4, Az и др. Несмотря на то, что эти слабые антигены встречают довольно редко, но они имеют определённое клиническое значение.

• групповой антиген В отличается большей однородностью. Описанные редкие его варианты (В2, В3, Bw и др.) существенного клинического значения не имеют;

• позже в первой группе крови 0(1) была найдена специфическая субстанция, также обозначенная символом «0». Фактор 0 — агглютиноген, присущий эритроцитам групп 0(I), A2(II), A2B(IV).

Для эритроцитов всех групп характерно наличие субстанции Н, её считают общим веществом-предшественником. Субстанцию Н чаще встречают у лиц с первой группой крови, в других же она содержится в незначительном количестве;

• в настоящее время известны так называемые кровяные химеры, обусловленные одновременным пребыванием в организме человека эритроцитов, принадлежащих двум фенотипам АВО. В естественных условиях явление кровяной химеры встречают у близнецов. Оно может также появиться при пересадке аллогенного костного мозга или переливании массивных объёмов крови. При определении группы крови и резус -принадлежности в условиях наличия кровяной химеры, как правило, получают искажённый результат (во всех сомнительных результатах направить образцы крови в специализированную лабораторию).

Список литературы

1. Приказ Минздрава России от 09.01.1998 № 2 «Об утверждении Инструкции по иммуносерологии».

2. Приказ Минздрава России от 25.11.2002 № 363 «Об утверждении Инструкции по применению компонентов крови».

3. Требования по проведению иммуногематологических исследований доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ. Методические указания № 2001/109. Минздрав России, НИИ гематологии и трансфузиологии, Санкт-Петербург, 2002.

4. Минеева Н.В. Группы крови человека. Основы иммуногемотологии. СПб., 2004. 188 с.

Библиографическое описание:

Тактаева, Е. В. Группа крови человека и проблемы при ее определении / Е. В. Тактаева. — Текст : непосредственный // Молодой ученый. — 2019. — № 2 (240). — С. 64-66. — URL: https://moluch.ru/archive/240/55598/ (дата обращения: 30.01.2023).

Группа крови — это генетически наследуемые признаки, не меняются в течение жизни в естественных условиях и описание индивидуальных антигенных характеристик эритроцитов, которые определяют с помощью методов идентификации специфических групп углеводов и белков, помещенных в мембраны эритроцитов человека или животного. Группа крови также характеризует системы эритроцитарных антигенов, или агглютиногенов (веществ, которые организм человека рассматривает как чужеродные, потенциально опасные, против которых начинает производить собственные антитела, см. агглютиноген), которые контролируются определенными локусами (конкретный участок в хромосоме), содержащие различное количество аллельных (варианты последовательности нуклеотидов ДНК в локусе) генов, таких, например., как A, B и 0 системе AB0. Наличие у людей разных Группа крови обусловлена ​​генетическими факторами, которые содержатся в длинном плече 9-й хромосомы.

К началу 20-го века никто и не подозревал, что кровь может быть разной. Переворот в этой области знаний сделал австрийский врач Карл Ландштейнер, который обнаружил и исследовал три антигены А, В и С. В 1901 году он поставил необычный эксперимент: он принимал сыворотки крови одних людей и смешивал с эритроцитами других, а именно взяв кровь себе и пяти своих сотрудников, отделив сыворотку от эритроцитов с помощью центрифуги и смешал отдельные образцы эритроцитов с сывороткой крови разных лиц и собственной. Некоторые сыворотки склеивали эритроциты, а некоторые — нет. И в зависимости от наличия или отсутствия этой реакции (агглютинации) были обнаружены группы крови.

В совместной работе с Л. Янским по наличию или отсутствию агглютинации Ландштейнер разделил все образцы крови на три группы: А, В и 0. Два года спустя ученики Ландштейнера, А. Штурли и А. Декастелло, открыли четвертую группу крови — АВ. Общепринятым является буквенно-цифровое обозначение Группы крови: первая — 0 (I), вторая группа — А (II), третья группа — В (iii), четвертая группа — АВ (IV). В среднеевропейской популяции по системе AB0 около 43 % людей имеют первую группу крови, 42 % — вторую, 11 % — третьего и около 4 % — четвертую. Группа крови по системе АВ0 отличают по наличию антигенов (агглютиногенов) на эритроцитах и ​​антител (агглютининов) в сыворотке крови (табл. 1).

Эритроцит может обладать только антигеном А (II группа крови), только антигеном В (III группы крови) или и А, и В одновременно (IV группа крови). Если же на поверхности эритроцитов нет ни одного из этих антигенов, значит, он относится к клеткам I (0) группы крови.

Кровь всегда готова к тому, что у нее могут попасть посторонние эритроциты. Если у человека есть антиген А (II группа крови), то в плазме обязательно присутствуют антитела бета. Как только в организм попадает эритроцит, что несет на себе антиген В, антитела тут же прилепятся чужака, как метка. Это передаст иммунной системе сигнал об опасности. У обладателей антигена В (III группы крови) функцию антитела играют альфа распознают эритроциты с А-антигеном.

Таблица 1

Основные факторы, обусловливающие групповую принадлежность крови по системе АВ0

Антигены системы АВО развиваются на эритроцитах еще до рождения ребенка. Например, антиген А находится на эритроцитах 37 дневного плода. Но полное развитие антиген получает после рождения, через несколько месяцев. У взрослых людей кроме антигенов А, В еще имеется антиген Н. Он предшественник антигенов А, В, но может быть и на поверхности эритроцитов первой группы.

В 1911 г обнаружены две подгруппы антигена А, а именно А1 и А2. Между собой они могут отличаться как качественно, так и количественно. Качественно — это особенности в биохимической структуре сахаров. А количественно — это большее количество детерминант в антигене А1. Поэтому факту определены подгруппы А2 и А2В.

Распознать А2 подгруппу можно по сильной активности взаимодействия анти-Н с А2 клетками чем с А1.

Для клинической практики наибольшее значение имеют две классификации Группа крови человека: система AB0 и резус-система (Rhesus) — вследствие того, что эти системы обладают наибольшей антигенной силой. При каждом переливании крови от человека к человеку обязательно учитывают совместимость именно с этими двумя системами, поскольку в случае переливания человеку другой (несовместимой) группы крови происходит агглютинация (склеивание) и гемолиз (разрушение) эритроцитов, что может привести смерти.

Наследование различных групп крови АВО-системы определяется различным сочетанием трех аллелей одной аллеломорфных группы генов, которые обозначаются как JA, β и I ‘и расположены в девять паре хромосом.

Аллель JA определяет образование антигена А на поверхности эритроцитов и агглютинина β в плазме крови, аллель JB — образование антигена В на эритроцитах и агглютинина α в плазме и, в конце концов, за аллеля J отсутствуют антигены А, В на поверхности эритроцитов и содержатся агглютинины α и β в плазме.

Генетические исследования показали, что в этой системе существуют следующие соотношения между генотипом и его фенотипическим проявлением:

‒ генотипы JAJA и JAJ0 дают одинаковый фенотип А с антигеном А и агглютининов β;

‒ генотипы JBJB и JBJ ° обусловливают одинаковый фенотип В с антигеном В и агглютининов α;

‒ генотип JAJB определяет фенотип АВ с антигенами А и В, но без агглютининов α и β;

‒ генотип J ° J ° вызывает фенотип 0 без антигенов А и В, но с агглютининами α и β.

Гены JA и JB в отношении гена J ° ведут себя доминантно.

Группы крови человека можно определить стандартными эритроцитами, цоликлонами (моноклональные антитела) как на плоскости, так и гелевыми технологиями. При определении могут возникнуть ошибки. Технические (например, неправильная маркировка крови и реагентов, неправильное соотношение, срок годности и т. д.), невысокое качество реактивов. Но самое важное это ошибки, обусловленные индивидуальными особенностями антигенов эритроцитов АВО. Поскольку антигены имеют сложную химическую структуру — гликолипиды, гликопротеины, гликозидные остатки, прикрепленные к олигосахаридным цепочкам. Даже сами олигосахаридные цепочки различны у антигенов А и В. Поэтому важно применять широкий спектр антител для определения антигенов. Количество детерминант на эритроцитах различное. При большом их количестве реакция агглютинации сильнее. Окружающая среда может влиять на модификацию антигенов. Детерминанты ослабевают или утрачиваются у онкологически больных людей, лейкозами. Эти изменения мало изучены. Они играют роль в нарушении синтеза трансфераз, ответственных за формирование антигенных детерминант А и В. Так же изменения имеют место при вирусной и бактериальной природе. При таких случаях возможно приобретение, например, В -подобного антигена. Он образуется вследствие влияния микроорганизмов взамен антигена А на мембране эритроцитов. Микроорганизмы выделяют ацетилазы, которые воздействуют на антиген А и последний становится похожим на антиген В. И что интересно, приобретенный антиген В не агглютинирует собственными анти-В антителами. Часто ошибки происходят при не выявлении антигена А2 в группе крови А или в группе крови А2В. Существуют ошибки, связанные со специфической и неспецифической агглютинацией. Это может связано наличием аутоантител как на эритроцитах, так и в сыворотке аллоантител.

Литература:

1. Лавряшина М. Б., Толочко Т. А., Волков А. Н. Аллоантигены крови человека: Учеб. пособ. — Кемерово, 2006; Практическая трансфузиология / Под ред. Г. И. Козинке. — М., 2005.
2. Википедия — статья «Группа крови».
3. Минеева Н. В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. Санкт-Петербург 2010 г. Издание 2-е.

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела. Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Для чего проводится анализ?

Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека. Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы. Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их. Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.

Что такое цоликлоны?

Цоликлон — это солевой раствор моноклональных антигенам к антител эритроцитов человека. Моноклональные антитела для употребляют определения группы крови. Для их используют получения гибридомную технологию. Цоликлоны анти-А и созданы-В анти для определения групп крови системы человека АВО взамен стандартных изогем-сывороток агглютинирующих.

Цоликлоны анти-А и анти-В являются гибридомных продуктом клеточных линий, приобретенных в итоге мышиных слияния антителообразующих В-лимфоцитов с клеточками мышиной опухоль (миеломы костного мозга). Личные гибридомные продуцируют полосы гомогенные антитела только 1-го класса которые, иммуноглобулинов целиком схожи по структуре и био Антитела. активности, продуцируемые клеточками 1-го клона (потомство клеточки одной), являются моноклональными.

В антителах клеток одной специфики, происходящих из 1-го образует, лимфоцита клеточки 1-го клона. Главное заключается в нужно: последующем получить от одной клеточки специальные наработать и антитела их в огромном количестве. Трудность заключается в задач 2-ух преодолении: во-1-х, обычные клеточки после нескольких гибнут делений; во-2-х, только раковые клеточки способны плодиться неограниченно. Для решения этих 2-ух несопоставимых 1975 в заморочек году Г. Кёлер и К. Мильштейн сделали модификации клеточные, либо гибридомы. Гибридомы — это обычных слияние лимфоцитов в питательной среде с клеточками Лимфоциты. миеломы в этой среде не гибнут, а от миеломного получают напарника возможность нескончаемо плодиться. Подобным гибридомный, образом клан плодится, а в итоге этого образуются процесса моноклональные антитела.

Как проводится исследование?

Для определения группы крови с использованием цоликлонов необходима плоская ровная поверхность (планшетка), смоченная водой, набор химических реагентов и пробы биологической жидкости, причем специалист может использовать любую кровь: капиллярную, венозную, замороженную и т. д.

1. Стороны планшета помечают, чтобы не перепутать, на какую из них будет нанесен тот или иной тип цоликлонов.

   

2. На поверхность капают по одной капле реагентов (обычно цилоклоны анти-А и анти-В) и крови, причем объем химических веществ должен в 8-10 раз превышать объем биоматериала.
3. Подождать 3-5 минут, аккуратно покачивая планшет, чтобы жидкости хорошо смешались, а эритроциты не оседали по краям образцов.

Спустя несколько минут наступит реакция, по которой можно с высокой точностью определить принадлежность крови к определенной группе.

Расшифровка результатов

Определение группы эритроцитарных антигенов и резус-фактора давно стало одним из обязательных исследований для большинства пациентов, поступающих на стационарное лечение. Его проведение возможно на любом уровне оказания медицинской помощи при условии наличия необходимых реагентов и инструментов.

Обычно, определение группы проводится с помощью стандартных сывороток, хотя, конкуренцию ему составляет еще один метод, сходный по методике проведения с эталонным использование цоликлонов.

Цоликлон моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Таблица. Реакции разных групп крови с цоликлоном анти-А и анти-В.

Что следует учитывать при проведении анализа?

Чтобы результат анализа был максимально достоверным, при проведении процедуры необходимо соблюдать ряд условий:

• реагенты должны храниться в холодном месте при температуре +2-8 градусов во флаконах с плотно закрученной крышкой (в случае нарушения правил хранения они быстро теряют свои свойства);
• для проведения анализа нельзя использовать цоликлоны с истекшим сроком хранения (он составляет около 30 дней) или жидкости, которые содержат осадок, хлопья или мусор;
• исследование выполняется в хорошо освещенном помещении при температуре воздуха не ниже +15 и не выше +25 градусов, причем в нем не должно быть грязи, пыли и других факторов, способных исказить результат;

  

• при нанесении биоматериала и реагентов на поверхность планшетки следует точно соблюдать пропорции – если крови будет слишком много, реакцию сложнее отследить, а в противоположном случае (при малом объеме) она будет слишком медленной;
• нельзя допускать, чтобы капли крови, смешанные с разными типами цоликлонов, сливались вместе – если это случилось, исследование проводят заново; по этой же причине для смешивания реагентов с биоматериалом следует использовать разные палочки.

Продолжительность реакции должна составлять не менее 3 минут, а при сомнительном результате время наблюдения за образцами биоматериала следует продлить до 5 минут. Однако по истечении 10 минут может произойти подсыхание биоматериала и естественное выпадение эритроцитов в осадок, поэтому доверять такому исследованию не стоит.

Для чего необходим анализ?

В настоящее время цоликлоны используются преимущественно для определения группы крови и резус-фактора. Исследование может проводиться как планово, по назначению участкового врача-терапевта, так и по экстренным показаниям, когда требуется переливание крови (в ходе операции произошла массивная кровопотеря или пациент был доставлен с обширной травмой и массивным кровотечением). В поликлинике определение группы проводится преимущественно за счет использования сывороток.

Группа крови по цоликлонам определяется чаще всего в стационаре или специализированных лабораториях. К использованию цоликлонов прибегают, обычно, при невозможности использования сывороток. Скорость получения результатов несколько быстрее, чем при исследовании стандартными сыворотками, что делает методику более универсальной. Многие лаборатории стремятся перейти на использование данного метода.

Видео — Определения групп крови с помощью цоликлонов